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谷胱甘肽還原酶（GR）檢測試劑盒（分光光度法50T/48S）
| 貨號 | SH0543 | 售價(jià)（元） | 336 |
| 規(guī)格 | 50T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0543 |
谷胱甘肽還原酶（GR）檢測試劑盒（分光光度法50T/48S） |
50T/48S |
測定意義：
GR是廣泛存在于真核和原核生物中的一種黃素蛋白氧化還原酶，是谷胱甘肽氧化還原循環(huán)的關(guān)鍵酶之一（通常昆蟲中GR被TrxR取代）。GR催化NADPH還原GSSG生成GSH，有助于維持體內(nèi)GSH/GSSG比值。GR在氧化脅迫反應(yīng)中對活性氧清除起關(guān)鍵作用，此外GR還參與抗壞血酸－谷胱甘肽循環(huán)途徑。
測定原理：
GR能催化NADPH還原GSSG再生GSH，同時(shí)NADPH脫氫生成NADP+；NADPH在340 nm有特征吸收峰，相反NADP+在該波長無吸收峰；通過測定340 nm吸光度下降速率來測定NADPH脫氫速率，從而計(jì)算GR活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0543-50T/48S |
Storage |
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試劑一：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
2瓶 |
-20℃ |
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試劑三：粉劑 |
2支 |
-20℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑二：粉劑×2瓶，-20℃保存。臨用前加入3 ml蒸餾水，混勻。
試劑三：粉劑×2支，-20℃保存。臨用前加入1.5 ml蒸餾水，混勻。
自備儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、移液器、1ml石英比色皿和蒸餾水
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心15min，取上清，置冰上待測。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心15min，取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體：直接測定。
操作步驟：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一置于25℃（普通物質(zhì)）或者37℃（哺乳動物）中預(yù)熱30min。
3. 測定管：取1ml石英比色皿，依次加入50μl試劑三，100μl試劑二， 750μl試劑一，100μl上清液，混勻，于340nm迅速測定初始吸光度和180 s吸光度，記為A測1和A測2，△A測定管= A測1﹣A測2。(注意加完上清液后迅速混勻測定)
計(jì)算公式：
(1). 按蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：在一定溫度中，pH8.0條件下，每毫克蛋白每分鐘催化1nmol NADPH氧化為1個(gè)酶活單位。
GR酶活(nmol/min/mg prot)= [ △A測定管÷ε÷d×V反總×109]÷[Cpr×V樣]÷T
= 536×△A測定管÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：在一定溫度中，pH8.0條件下，每克樣本每分鐘催化1nmol NADPH氧化為1個(gè)酶活單位。
GR酶活(nmol/min/g 鮮重)= [ △A測定管÷ε÷d×V反總×109] ÷(W×V樣÷V樣總)÷T
= 536×△A測定管÷W
(3) 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義：在一定溫度中，pH8.0條件下，每104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化1nmol NADPH氧化為1個(gè)酶活單位。
GR酶活(nmol/min/104 cell)= [ △A測定管÷ε÷d×V反總×109] ÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
= 536×△A測定管÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計(jì)算
活性單位定義：在一定溫度中，pH8.0條件下，每毫升液體每分鐘催化1nmol NADPH氧化為1個(gè)酶活單位。
GR酶活(nmol/min/ml)= [ △A測定管÷ε÷d×V反總×109]÷×V樣÷T
= 536×△A測定管
ε：NADPH摩爾消光系數(shù)6.22×103L/mol/cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，1000μl=0.001 L；106：1 mol=1×106μmol； Cpr：上清液蛋白濃度（mg/ml）；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，100μl =0.1 ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，3 min。
注意事項(xiàng)：
（1）樣品處理等過程均需要在冰上進(jìn)行，且須在當(dāng)日測定酶活力，勻漿液避免反復(fù)凍融；
（2）試劑二和試劑三須現(xiàn)配現(xiàn)用，配制完后，置于冰上，未使用完的4℃保存，三天內(nèi)使用完。
（3）測定前須先用1～2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，哺乳動物組織一般須用試劑一稀釋2～5倍。
（4）細(xì)胞中GR活性測定時(shí)，細(xì)胞數(shù)目須在300萬-500萬之間，細(xì)胞中GR的提取時(shí)可加試劑一后研磨或超聲波處理，不能用細(xì)胞裂解液處理細(xì)胞。