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磷脂酶C（PLC ）檢測試劑盒(分光光度法50T/48S)
| 貨號 | SH0476 | 售價（元） | 5040 |
| 規(guī)格 | 50T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0476 |
磷脂酶C（PLC ）檢測試劑盒(分光光度法50T/48S) |
50T/48S |
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
磷脂酶C（EC 3.1.4.3）是一種水解甘油磷酸酯C3位點甘油磷酸酯鍵的脂類水解酶，廣泛存在于微生物及動植物的組織和細(xì)胞中，在細(xì)胞代謝、細(xì)胞傳遞、生長發(fā)育等方面具有重要作用。
測定原理：
磷脂酶C催化水解NPPC產(chǎn)生對硝基苯酚，在410nm處有特征吸收峰。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0476-50T/48S |
Storage |
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提取液：液體 |
50ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
55ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
25ml |
4℃避光 |
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試劑三：液體 |
20ml |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
天平、研缽、超速冷凍離心機、可見分光光度計、1 ml玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
酶液提取：
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1ml提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心5min，取全部上清于4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于1ml試劑一。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后于4℃，10000g離心5min，取全部上清于4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于1ml試劑一。
3. 血清：直接測定。
測定操作：
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空白管 |
測定管 |
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樣品（μl） |
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100 |
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試劑一（μl） |
100 |
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試劑二（μl） |
500 |
500 |
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充分混勻，37℃反應(yīng)30min |
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試劑三（μl） |
400 |
400 |
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充分混勻，于1ml玻璃比色皿，蒸餾水調(diào)零，測定410nm處吸光值，分別記為A空白管和A測定管，△A=A測定管-A空白管。 |
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酶活計算公式：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0191x - 0.0103，R2 = 0.9991
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T
= 17.45×（△A+0.0103）÷ Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：每克組織每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/g 鮮重）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T
= 17.45×（△A+0.0103）÷ W
3．按照細(xì)胞數(shù)量計算
酶活性定義：每104個細(xì)胞每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/104 cell）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量) ÷T
= 17.45×（△A+0.0103）÷ 細(xì)胞數(shù)量
4．按照液體體積計算
酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/ml）= （△A+0.0103）÷ 0.0191×V反總÷V樣÷T
= 17.45×（△A+0.0103）
V反總：反應(yīng)總體積，1ml；V樣：加入樣本體積，0.1ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，30min