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磷脂酶D（ PLD ）檢測試劑盒(分光光度法50T/48S)
| 貨號 | SH0474 | 售價（元） | 4080 |
| 規(guī)格 | 50T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0474 |
磷脂酶D（ PLD ）檢測試劑盒(分光光度法50T/48S) |
50管/48樣 |
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
磷脂酶D（EC3.1.4.4）即磷脂酰膽堿水解酶，是催化磷酸二酯鍵水解和堿基交換反應(yīng)的一類酶的總稱，廣泛存在于高等動植物和細菌等多種生物體中，具有參與細胞脂質(zhì)代謝、信號傳導、生物膜形成的抗逆境脅等生理功能。
測定原理：
磷脂酶D催化水解磷脂酰膽堿末端的磷脂酰二酯鍵生成磷脂酸和膽堿，膽堿在膽堿氧化酶催化作用下生成甜菜堿和過氧化氫，過氧化氫在過氧化氫酶的作用下將4-氨基安替比林和重蒸酚氧化成粉紅色物質(zhì)，在500nm處有特征吸收峰。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0474-50T/48S |
Storage |
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提取液：液體 |
50ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
55ml |
4℃避光 |
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試劑二：液體 |
8ml |
4℃避光 |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
-20℃避光 |
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試劑四：液體 |
35ml |
4℃避光 |
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標準品：液體 |
1ml |
4℃避光 |
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說明書 |
一份 |
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試劑三：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加3ml無水乙醇充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
自備儀器和用品：
天平、研缽、超速冷凍離心機、可見分光光度計、1 ml玻璃比色皿、恒溫水浴鍋，無水乙醇。
酶液提取
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1ml提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心5min，取全部上清于4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于1ml試劑一。
2. 細胞：按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后于4℃，10000g離心5min，取全部上清于4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于1ml試劑一。
3. 血清：直接測定。
測定操作
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空白管 |
標準管 |
測定管 |
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試劑一（μl） |
100 |
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試劑二（μl） |
150 |
150 |
150 |
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標準品（μl） |
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100 |
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樣品（μl） |
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100 |
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試劑三（μl） |
50 |
50 |
50 |
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充分混勻，30℃反應(yīng)30min，沸水浴10min，打開蓋子，自然冷卻5min。 |
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試劑四（μl） |
700 |
700 |
700 |
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30℃反應(yīng)30min，于1ml玻璃比色皿，空白管調(diào)零，測定500nm處吸光值，分別記為A標準管和A測定管。 |
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酶活計算公式
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解磷脂酰膽堿產(chǎn)生1nmol膽堿所需的酶量一個酶活力單位。
PLD活性（nmol/min/mg prot）= 
×C標準÷Cpr÷T= 16.7 ×
÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：每克組織每分鐘水解磷脂酰膽堿產(chǎn)生1nmol膽堿所需的酶量一個酶活力單位。
PLD活性（nmol/min/g 鮮重）= 
×C標準÷W÷T = 16.7×
÷W
3．按照細胞數(shù)量計算
酶活性定義：每104個細胞每分鐘水解磷脂酰膽堿產(chǎn)生1nmol膽堿所需的酶量一個酶活力單位。
PLD活性（nmol/min/104 cell）= 
×C標準÷細胞數(shù)量÷T = 16.7×
÷細胞數(shù)量
4．按照液體體積計算
酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解磷脂酰膽堿產(chǎn)生1nmol膽堿所需的酶量一個酶活力單位。
PLD活性（nmol/min/ml）= 
×C標準÷T=16.7×
C標準：標準品濃度，500nmol/ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g/ml；T：反應(yīng)時間，30min
注意事項
1. 顯色完成后，若有沉淀，于8000g，25℃離心5min后取上清測定。
2. 吸光值不宜超過1，否則用試劑一將酶液進行稀釋，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。