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土壤亞硝酸還原酶（S-NiR）檢測(cè)試劑盒（微量法100T/48S）
| 貨號(hào) | SH0382 | 售價(jià)（元） | 1200 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0382 |
土壤亞硝酸還原酶（S-NiR）檢測(cè)試劑盒（微量法100T/48S） |
100T/48S |
測(cè)定意義：
土壤亞硝酸還原酶是反硝化作用中的關(guān)鍵酶之一，參與亞硝酸鹽至NO的還原反應(yīng)，它的活性反映了生物降解過程中氮素的轉(zhuǎn)化效率，為氮素轉(zhuǎn)化規(guī)律的研究提供一定的依據(jù)。
測(cè)定原理：
亞硝酸還原酶可將NO2—還原為NO，使樣品中參與重氮化反應(yīng)生成紫紅色化合物的NO2—減少，即540nm處吸光值的變化可反應(yīng)土壤中亞硝酸還原酶的活性。
試劑的組成和配制：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0382-100T/48S |
Storage |
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試劑一：液體 |
4ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑三：液體 |
4ml |
4℃ |
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試劑四：液體 |
10ml |
4℃避光 |
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試劑五：液體 |
10ml |
4℃避光 |
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說明書 |
一份 |
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試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加4ml蒸餾水溶解。
試劑三：液體4ml×1瓶，4℃保存。（如出現(xiàn)沉淀可以70-80℃加熱溶解）
試劑四：液體10ml×1瓶，4℃避光保存。（如出現(xiàn)沉淀可以70-80℃加熱溶解）
工作液：臨用前根據(jù)用量將試劑四和試劑五以1:1的比例混合。
自備儀器和用品：
天平、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、水浴鍋、低溫離心機(jī)。
樣品處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。
測(cè)定操作表：
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空白管 |
對(duì)照管 |
測(cè)定管 |
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風(fēng)干土樣（g） |
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0.02 |
0.02 |
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蒸餾水（μl） |
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40 |
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試劑一（μl） |
40 |
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40 |
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混勻后，25℃反應(yīng)1h |
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試劑三（μl） |
40 |
40 |
40 |
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充分震蕩30S，10000rpm，4℃，離心10min |
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上清液（μl） |
70 |
70 |
70 |
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工作液（μl） |
140 |
140 |
140 |
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充分混勻，靜置3min后測(cè)定540nm處吸光值，分別記為A空白管、A對(duì)照管、A測(cè)定管?？瞻坠苤灰鲆还?，每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。 |
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計(jì)算公式：
a. 使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 1.5562x+ 0.0088，R2 = 0.996；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/ml），y為吸光值（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）。
酶活單位定義：每g土樣每天還原1μmol NO2ˉ 的量為一個(gè)酶活力單位。
S-NiR（μmol /d /g土樣）=[A空白管-(A測(cè)定管-A對(duì)照管) -0.0088]÷1.5562×V標(biāo)÷W÷T
= 0.617×[A空白管-(A測(cè)定管-A對(duì)照管) -0.0088]÷W
T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d；V標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)液體積，0.04ml；W：樣本質(zhì)量，g。
b. 使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.7781x+ 0.0088，R2 = 0.996；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/ml），y為吸光值（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）。
酶活單位定義：每g土樣每天還原1μmol NO2ˉ 的量為一個(gè)酶活力單位。
S-NiR（μmol /d /g土樣）=[A空白管-(A測(cè)定管-A對(duì)照管) -0.0088]÷0.7781×V標(biāo)÷W÷T
= 1.234×[A空白管-(A測(cè)定管-A對(duì)照管) -0.0088]÷W
T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d；V標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)液體積，0.04ml； W：樣本質(zhì)量，g。
注意事項(xiàng):
1. 配制好的工作液3天內(nèi)使用完。
2. 若吸光值超過1.5，將上清液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尯笤偌尤牍ぷ饕猴@色，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
3. 嚴(yán)格控制顯色時(shí)間，否則會(huì)對(duì)結(jié)果有影響。
4. 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為0.03μmol/ml-1.5μmol/ml。
5. A空白管-（A測(cè)定管-A對(duì)照管）線性范圍為0.02-1.5。