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植物蔗糖酶檢測試劑盒（微量法 100T/48S）
| 貨號 | SH0305 | 售價（元） | 960 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0305 |
植物蔗糖酶檢測試劑盒（微量法 100T/48S） |
100管/48樣 |
測定意義：
蔗糖酶（EC 3.2.1.26）是碳水化合物消化吸收的關鍵酶之一，能夠水解蔗糖變成相應的單糖而被機體吸收。
測定原理：
本試劑盒采用3.5－二硝基水楊酸法測定蔗糖酶催化產(chǎn)生的還原糖的含量，由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是3.5－二硝基水楊酸與還原糖共熱被還原成棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內(nèi)還原糖的量和反應液的顏色深度成正比。此法操作簡便、迅速、雜質干擾較小。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0305-100T/48S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
2ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1支 |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
3ml |
常溫保存 |
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說明書 |
一份 |
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試劑二：粉劑×1支 ，4℃保存，用時加入1ml蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存；
自備儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、沸水浴、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣品測定的準備：
按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至520nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 樣本測定，（在EP管中依次加入下列試劑）：
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試劑名稱（μl） |
對照管 |
測定管 |
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試劑一 |
15 |
15 |
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蒸餾水 |
15 |
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樣本 |
30 |
30 |
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試劑二 |
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15 |
置于 25℃準確水浴10min
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試劑三 |
30 |
30 |
混勻， 95℃水浴5min左右（蓋緊，防止水分散失），冷卻至室溫
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蒸餾水 |
210 |
210 |
混勻，取200μl至微量石英比色皿或96孔板中測定各管520nm吸光值，ΔA=A測定-A對照，每個測定管需設一個對照管。
蔗糖酶活力計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、標準條件下測定的回歸方程為y = 0.1296x -0.12；x為標準品濃度（mg/ml），y為吸光值。
2、按照蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化水解1μg蔗糖定義為一個酶活力單位。
蔗糖酶活力(μg/min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(V1×Cpr)÷T=771×(ΔA +0.12)÷Cpr。
3、按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織每分鐘催化水解1μg蔗糖定義為一個酶活力單位。
蔗糖酶活力(μg/min/g鮮重)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(W×V1÷V2)÷T=771×(ΔA +0.12) ÷W。
1000：1mg/ml=1000μg/ml；V1：加入反應體系中樣本體積，0.03ml；V2：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，10min； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0648x -0.12；x為標準品濃度（mg/ml），y為吸光值。
2、按照蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化水解1μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。
蔗糖酶活力(μg/min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.0648×V1]÷(V1×Cpr)÷T=1542×(ΔA +0.12)÷Cpr。
3、按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘催化水解1μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。
蔗糖酶活力(μg/min/g鮮重)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.0648×V1]÷(W×V1÷V2)÷T=1543×(ΔA +0.12) ÷W。
1000：1mg/ml=1000μg/ml；V1：加入反應體系中樣本體積，0.03ml；V2：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，10min； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g。