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因 Cas12a 在 CRISPR 核酸檢測(cè)過程中被激活后的非特異性切割特性限制了多靶點(diǎn)的檢測(cè)。因此，作者設(shè)計(jì)了一種壓力輔助的離心驅(qū)動(dòng)的呼吸道病原體檢測(cè)微流控芯片，該芯片可在 30 min 內(nèi)完成 14 重檢測(cè)。
如圖 1，直徑 80 mm 的芯片由 CNC 雕刻而成。該芯片含有 14 個(gè)獨(dú)立的檢測(cè)單元，一次可完成 14 個(gè)靶標(biāo)檢測(cè)。
圖 1
芯片內(nèi)環(huán)上有一個(gè)公用的彎曲流道，連接著 14 個(gè)檢測(cè)單元，每個(gè)檢測(cè)單元包括一個(gè) RPA 擴(kuò)增腔和一個(gè) CRISPR 檢測(cè)腔，用于單個(gè)靶標(biāo)檢測(cè)。
芯片最窄處的流體通道寬 0.2 mm，RPA 和CRISPR 檢測(cè)腔的體積均為10 μL。
圖 2
如圖 3，彎曲流道與 RPA 腔之間的短流道逐漸加寬，以減少前后腔連接流道之間的流動(dòng)阻力。同時(shí)，每個(gè) RPA 腔與 CRISPR 檢測(cè)腔之間的流道都是疏水的。
樣本注入末端設(shè)有廢液腔，用于存放進(jìn)樣后殘留的液體。每個(gè)檢測(cè)單元均設(shè)有通氣孔，通氣孔內(nèi)裝有高密度聚乙烯顆粒棉濾，以防氣溶膠污染。
圖 3
將特異性的 RPA 引物 和 CRISPR 檢測(cè)試劑凍干制成微球，預(yù)存于擴(kuò)增腔和檢測(cè)腔內(nèi)。
將純化后的核酸樣品與rpa緩沖液、醋酸鎂和無核酸酶水混合，形成 164 μl 的溶液。制備好加標(biāo)體系后，用移液槍將164 μl 反應(yīng)體系吸出，緩慢均勻地注入芯片中。
圖4
操作時(shí)，通過加樣口加入樣品和凍干試劑復(fù)溶液，使其依次進(jìn)入到擴(kuò)增腔內(nèi)。隨后通過加樣口加入石蠟油，將流道內(nèi)殘留的液體推入廢液腔，并隔離擴(kuò)增腔。
圖 5
相關(guān)產(chǎn)品：
RPA試劑盒及試紙條系列：
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貨號(hào) |
產(chǎn)品 |
規(guī)格 |
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TABAS03KIT |
TwistAmp Basic Kit DNA擴(kuò)增試劑盒 |
96T |
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TAEXO02KIT |
TwistAmp exo 試劑盒 |
96T |
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B8201C1 |
DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（DNA基礎(chǔ)型） |
48T |
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B8202C3 |
DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（DNA熒光型） |
48T |
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B8203C5 |
DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（DNA試紙條型） |
48T |
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B8204C7 |
RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（RNA基礎(chǔ)型） |
48T |
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B8205C9 |
RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（RNA熒光型） |
48T |
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B8206C0 |
RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（RNA試紙條型） |
48T |
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JY0209 |
雙靶標(biāo)HybriDetect側(cè)向?qū)游鲈嚰垪l（彩虹型） |
50T |
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JY0201 |
單靶標(biāo)HybriDetect側(cè)向?qū)游鲈嚰垪l（彩虹型） |
50T |
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JY0307 |
CRISPR單酶切及擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)試紙條 |
50T |
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JY0301 |
CRISPR Cas12/13 HybriDetect試紙條 |
50T |
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JY0308 |
CRISPR雙酶切檢測(cè)試紙條（變色龍） |
50T |
Cas酶系列
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貨號(hào) |
包裝規(guī)格 |
中文名稱 |
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32108-01 |
100 pmoL |
LbCas12a (Cpf1) |
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32108-03 |
1,000 pmoL |
LbCas12a (Cpf1) |
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32117-01 |
100 pmoL |
LwaCas13a (C2c2) |
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32117-03 |
1,000 pmoL |
LwaCas13a (C2c2) |
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32118-01 |
100 pmoL |
AapCas12b (C2c1) |
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32118-03 |
1,000 pmoL |
AapCas12b (C2c1) |
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32119-01 |
100 pmoL |
Un1Cas12f1 (Cas14a1) |
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32119-03 |
1,000 pmoL |
Un1Cas12f1 (Cas14a1) |
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32104-01 |
100 pmoL |
AsCas12a (Cpf1) |
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32104-03 |
1,000 pmoL |
AsCas12a (Cpf1) |
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32116-01 |
100 pmoL |
AacCas12b (C2c1) |
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32116-03 |
1,000 pmoL |
AacCas12b (C2c1) |
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32106-01 |
100 pmoL |
FnCas12a (Cpf1) |
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32106-03 |
1,000 pmoL |
FnCas12a (Cpf1) |
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32110-01 |
100 pmoL |
Lb5Cas12a (Cpf1) |
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32110-03 |
1,000 pmoL |
Lb5Cas12a (Cpf1) |
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32101-01 |
100 pmoL |
SpCas9 |
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32101-03 |
1,000 pmoL |
SpCas9 |
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32102-01 |
100 pmoL |
Sp-dCas9 |
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32102-03 |
1,000 pmoL |
Sp-dCas9 |
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32120-01 |
100 pmoL |
Sp-nCas9（H840A） |
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32120-03 |
1,000 pmoL |
Sp-nCas9（H840A） |