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吐露港（ToloBio）生物科技有限公司首次發(fā)現(xiàn) CRISPR-Cas12蛋白具備高效的“反式切割活性”，并基于該酶的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)研發(fā)了“福爾摩斯/HOLMES”核酸快速檢測(cè)平臺(tái)技術(shù)（one-Hour Low-cost Multipurpose highly Efficient System）。相比于傳統(tǒng)的分子診斷技術(shù)，基于CRISPR的HOLMES技術(shù)具備高靈敏、高特異、快速便捷等優(yōu)勢(shì)，被《Science》雜志譽(yù)為“下一代分子診斷技術(shù)”，在病原菌檢測(cè)、遺傳疾病篩查、精準(zhǔn)醫(yī)療等眾多領(lǐng)域有很大的應(yīng)用潛力。
Cas12a
HOLMES檢測(cè)平臺(tái)[1]
· Cas12a家族是一類由單個(gè)crRNA介導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶
· 在HOLMES核酸檢測(cè)系統(tǒng)中，Cas12a: crRNA: 靶標(biāo)DNA分子三元復(fù)合物的形成會(huì)激活Cas12a的反式剪切活性，可無(wú)差別的剪切反應(yīng)體系中的ssDNA分子，包括熒光標(biāo)記的ssDNA探針，從而產(chǎn)生大量的熒光信號(hào)，指示檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
應(yīng)用 |
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LbCas12a(Cpf1) Nuclease |
100 pmol |
32108-01 |
不僅可用于體外dsDNA的特異剪切，也可用于靶標(biāo)核酸的快速檢測(cè)，詳見(jiàn)HOLMES核酸快檢技術(shù)[1] |
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1000 pmol |
32108-03 |
Cas12b
HOLMESv2檢測(cè)平臺(tái)[2]: 率先實(shí)現(xiàn)“一管法”和“絕對(duì)定量”
· 采用嗜熱菌來(lái)源的Cas12b，比Cas12a更加耐熱，使核酸擴(kuò)增與靶標(biāo)檢測(cè)在同一管中進(jìn)行
· Cas12b: crRNA: 靶標(biāo)DNA三元復(fù)合物會(huì)激活Cas12b的反式剪切活性, 可無(wú)差別剪切反應(yīng)中的ssDNA分子，包括熒光標(biāo)記的ssDNA探針，從而產(chǎn)生大量的熒光信號(hào)，指示檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性
· “一管法”體系既能保持對(duì)SNP和甲基化位點(diǎn)的分辨能力，又有效地避免氣溶膠污染的風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)縮短檢測(cè)耗時(shí)
· 通過(guò)結(jié)合HOLMESv2與digital PCR體系，可實(shí)現(xiàn)對(duì)靶標(biāo)核酸的絕對(duì)定量
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
應(yīng)用 |
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AapCas12b(C2c1) Nuclease |
100 pmol |
32118-01 |
最佳反應(yīng)溫度為60℃，可與LAMP恒溫?cái)U(kuò)增聯(lián)用，實(shí)現(xiàn)一步法CRISPR檢測(cè)體系，詳見(jiàn)HOLMESv2核酸快檢技術(shù)[2] |
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1000 pmol |
32118-03 |
Cas13a
ToloBio擁有Cas12核酸檢測(cè)的方法學(xué)專利，并在2020年與美國(guó)科學(xué)院院士張鋒教授領(lǐng)銜創(chuàng)立的Sherlock Biosciences就Cas12和Cas13診斷技術(shù)達(dá)成了中美市場(chǎng)的“專利交叉授權(quán)”合作。2022年11月，雙方又進(jìn)一步簽署了全球范圍內(nèi)的CRISPR診斷“專利交叉授權(quán)”合作協(xié)議，完成了ToloBio在CRISPR檢測(cè)領(lǐng)域方法學(xué)專利的全面布局。
HOLMES與SHERLOCK“雙劍合璧”[3]
· Cas13家族是一類由crRNA單獨(dú)介導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶，可特異地識(shí)別并剪切靶標(biāo)ssRNA
· Cas13與crRNA、靶標(biāo)RNA形成三元復(fù)合物后，激活針對(duì)非特異序列ssRNA的“反式剪切活性”，將體系中的ssRNA切碎
· 靶標(biāo)RNA濃度越高，體系反式剪切ssRNA報(bào)告探針的速度更快，釋放熒光信號(hào)到達(dá)平臺(tái)期的時(shí)間越短
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
應(yīng)用 |
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LwaCas13a(C2c2) Nuclease |
100 pmol |
32117-01 |
反式剪切RNA報(bào)告探針，可用于開(kāi)發(fā)靶標(biāo)核酸的快速檢測(cè)試劑盒 |
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1000 pmol |
32117-03 |
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貨號(hào) |
產(chǎn)品 |
規(guī)格 |
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JY0209 |
雙靶標(biāo)HybriDetect側(cè)向?qū)游鲈嚰垪l（彩虹型） |
50T |
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JY0307 |
Tiosbio? CRISPR單酶切及擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)試紙條 |
50T |
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JY0301 |
CRISPR Cas12/13 HybriDetect試紙條 |
50T |
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JY0308 |
Tiosbio? CRISPR雙酶切檢測(cè)試紙條（變色龍） |
50T |
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WLB8201KIT |
DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（基礎(chǔ)型） |
48T |
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WLE8202KIT |
DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（熒光型） |
48T |
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WLN8203KIT |
DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（膠體金試紙條型） |
48T |
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WLRB8204KIT |
RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（基礎(chǔ)型） |
48T |
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WLRE8205KIT |
RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（熒光型） |
48T |
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WLRN8206KIT |
RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（膠體金試紙條型） |
48T |
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WLB5001 |
DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體基礎(chǔ)型） |
100T |
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WLN5002 |
DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體膠體金型） |
100T |
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WLR5003 |
DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體熒光型） |
100T |
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WLRB5001 |
RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體基礎(chǔ)型） |
100T |
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WLRN5002 |
RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體膠體金型） |
100T |
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WLRE5003 |
RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體熒光型） |
100T |
Cas12f
不同靶ssDNA存在時(shí)，Cas12f1行使高效反式剪切活性的熒光信號(hào)結(jié)果
· Cas12f核酸酶是依賴sgRNA介導(dǎo)的內(nèi)切核酸酶，傾向于特異結(jié)合并剪切靶標(biāo)ssDNA，且無(wú)需PAM位點(diǎn)
· Cas12f蛋白分子量普遍較?。s61.5kD），這是其主要優(yōu)勢(shì)之一
· 與Cas12a/b功能類似，已有文獻(xiàn)報(bào)道，Cas12f對(duì)ssDNA靶標(biāo)中SNP位點(diǎn)的分辨能力高于Cas12[4]。
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
應(yīng)用 |
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Un1Cas12f1(Cas14a1) Nuclease |
100 pmol |
32119-01 |
與Cas12a/b功能類似，Cas12f也可用于靶標(biāo)核酸的快速檢測(cè) |
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1000 pmol |
32119-03 |
CRISPR-Dx的優(yōu)勢(shì)
· 多重：聯(lián)檢/降本；微流控/盤(pán)式芯片；色碼CARMEN；體系多重
· 絕對(duì)定量：液相微球/固態(tài)微孔
· 超靈敏/特異：1-2個(gè)拷貝可測(cè)；識(shí)別PCR灰區(qū)、SNP位點(diǎn)、甲基化位點(diǎn)
· 超快速：1-5min內(nèi)完成剪切；恒溫?cái)U(kuò)增；One-Step；免擴(kuò)增；免提取核酸
· POCT/全自動(dòng)：LFA；LDT；全流程自動(dòng)化；便捷/成本低
其他CRISPR-Dx產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
貨號(hào) |
規(guī)格 |
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AsCas12a(Cpf1) |
32104-01 |
100 pmol |
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32104-03 |
1000 pmol |
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AacCas12b(C2c1) |
32116-01 |
100 pmol |
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32116-03 |
1000 pmol |
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FnCas12a(Cpf1) |
32106-01 |
100 pmol |
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32106-03 |
1000 pmol |
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Lb5Cas12a(Cpf1) |
32110-01 |
100 pmol |
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32110-03 |
1000 pmol |
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SpCas9 |
32101-01 |
100 pmol |
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32101-03 |
1000 pmol |
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Sp-dCas9 |
32102-01 |
100 pmol |
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32102-03 |
1000 pmol |
Cas Protein表達(dá)質(zhì)粒
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產(chǎn)品名稱 |
貨號(hào) |
規(guī)格 |
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pET28TEV-AsCas12a |
92104 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-AsCas12a-NLS |
92105 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-FnCas12a |
92106 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-FnCas12a-NLS |
92107 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-LbCas12a |
92108 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-LbCas12a-NLS |
92109 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-Lb5Cas12a |
92110 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-BbCas12a |
92111 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-BoCas12a |
92112 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-HkCas12a |
92113 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-OsCas12a |
92114 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-TsCas12a |
92115 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-AacCas12b |
92116 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-LwaCas13a |
92117 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-AapCas12b |
92118 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-Un1Cas12f1 (Cas14a1) |
92119 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-Lb4Cas12a |
92120 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
CRSIPR體系反式剪切報(bào)告探針
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品名 |
貨號(hào) |
規(guī)格 |
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HOLMES ssDNA reporter (FAM) |
31101 |
10 nmol powder |
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HOLMES ssRNA reporter (FAM) |
31111 |
10 nmol powder |
Reference:
[1] Li S, Cheng Q, Wang J, et al. CRISPR-Cas12a-assisted nucleic acid detection[J]. Cell Discovery. 2018, 4: 20.
[2] Li L, Li S, Wu N, et al. HOLMESv2: A CRISPR-Cas12b-Assisted Platform for Nucleic Acid Detection and DNA Methylation Quantitation[J]. ACS Synthetic Biology. 2019, 8(10): 2228-2237.
[3] Gootenberg JS, Abudayyeh OO, Lee JW, et al. Nucleic acid detection with CRISPR-Cas13a/C2c2. Science. 2017;356(6336):438-442.
[4] Harrington LB, Burstein D, Chen JS, et al. Programmed DNA destruction by miniature CRISPR-Cas14 enzymes. Science. 2018;362(6416):839-842.
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