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細(xì)胞分選常見疑問？？
問題一
為什么建議磁珠分選而不是流式分選？
1)磁珠分選需要的設(shè)備簡(jiǎn)單，而流式分選需要配備分選型流式細(xì)胞儀，價(jià)格較為昂貴，而且流式分選對(duì)于操作員的技術(shù)要求很高，需要專門的培訓(xùn)并有一定的經(jīng)驗(yàn)后才能很好地完成流式分選；
2)磁珠分選所需要的時(shí)間遠(yuǎn)小于流式分選所需要的時(shí)間；
3)磁珠分選對(duì)于目的細(xì)胞的刺激比流式分選要小，流式分選過程中需要對(duì)目的細(xì)胞所在的液滴通電，并且需要經(jīng)過一個(gè)強(qiáng)電場(chǎng)的區(qū)域，對(duì)目的細(xì)胞的刺激相對(duì)較大；磁珠分選只是讓細(xì)胞處于一個(gè)低磁場(chǎng)中，基本可以忽略對(duì)細(xì)胞的影響，從保持細(xì)胞活力的方面考慮，磁珠分選要優(yōu)于流式分選。
因此，如果磁珠分選可以滿足實(shí)驗(yàn)需求時(shí)，應(yīng)盡量選擇磁珠分選的方法。
問題二
磁珠分選為什么要求細(xì)胞活性越高越好？
1)死細(xì)胞分泌DNA，DNA有粘性，會(huì)將磁珠標(biāo)記細(xì)胞和非標(biāo)記細(xì)胞粘在一起，如果是陽選會(huì)影響純度，如果是陰選會(huì)影響得率。
2)細(xì)胞活性低時(shí)可能會(huì)影響抗原抗體的結(jié)合效率。
問題三
磁珠分選buffer是什么？
autoMACS running buffer（自己配制：pH7.2 PBS，0.5％BSA、2mM EDTA，如需無菌，建議購買商品化buffer或紫外線照射，不建議高溫高壓滅菌）。
問題四
如果想分選的細(xì)胞有多個(gè)陽性marker怎么辦？
可以選擇磁珠分選陰選+陽選的方法，eg.分選小鼠脾臟naive CD4+T可以先用陰選的方法分到CD4+T細(xì)胞再用CD62L磁珠陽性分選；也可以用磁珠+流式的方法。
問題五
分選柱可以二次使用嗎？
不建議，主要是分選柱內(nèi)填充的鐵珠在使用后易生銹。
問題六
分選柱應(yīng)如何選擇？
不同的試劑盒對(duì)于MS/LS/LD柱的最大細(xì)胞上樣量和最大磁性細(xì)胞吸附量是不同的，建議一定要參考說明書；
此外，如分選的目的細(xì)胞較大（eg.巨核細(xì)胞或fibroblast），可考慮采用large cell colums。