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豬藍(lán)耳病毒熒光定量PCR檢測試劑盒
| 貨號 | SH0630 | 售價（元） | 2640 |
| 規(guī)格 | 50T | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0630 |
豬藍(lán)耳病毒熒光定量PCR檢測試劑盒 |
50 頭份/盒 |
用于豬脾臟、淋巴結(jié)、肉品、血液及血液制品中豬藍(lán)耳病毒核酸的檢測。
用法與判定：
使用病毒 DNA/RNA 核酸提取試劑盒提取核酸，按照如下步驟操作：
熒光 PCR 反應(yīng)體系的配置：取出試劑盒中的各組分，置室溫（15-25℃）融化后瞬時離心，備用。每 次檢驗設(shè)陰、陽性對照。設(shè)待檢樣品、陽性對照和陰性對照的樣品總份數(shù)為 n，按如下反應(yīng)體系配置：：
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酶系 one-step RT-qPCR Mix |
1.5ul x（n+1） |
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5x one-step RT-qPCR Buffer |
5ul x（n+1） |
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引物探針預(yù)混液 |
7.5ul x（n+1） |
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總量 |
25ul x（n+1） |
將以上配置的反應(yīng)體系充分混勻后，按 25ul/管分裝至反應(yīng)管中。分別取提取的核酸樣品 5ul 加入相
應(yīng)反應(yīng)管中，蓋緊管蓋后瞬時離心。
1.熒光 PCR 反應(yīng)條件：
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溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
說明 |
是否收集信號 |
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45℃ |
15 min |
1 |
反轉(zhuǎn)錄 |
否 |
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95℃ |
3min |
1cycle |
預(yù)變性 |
否 |
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95℃ |
15sec |
40-45cycle |
變性 |
否 |
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60℃ |
30sec |
退火，延伸 |
是（FAM） |
對于 ABI 熒光 PCR 儀，選擇 FAM 通道讀取檢測結(jié)果，淬滅基團(tuán)選擇“MGB”；
對于其它品牌的熒光 PCR 儀，選擇 FAM 通道讀取檢測結(jié)果，淬滅基團(tuán)選擇“None” 本產(chǎn)品使用特殊的 ROX Reference Dye，適用于所用 qPCR 儀器，無需在不同的儀器上調(diào)整 ROX 的
濃度。
2.試驗成立條件：陽性對照 Ct 值≤35 并出現(xiàn)典型的擴增曲線，陰性對照無 Ct 值或無典型的擴增曲 線，則判為試驗成立。
3.判定：待檢測樣品 Ct 值≤35 并出現(xiàn)典型的擴增曲線，判為陽性；待檢樣品無 Ct 值或 35＜Ct 值
≤40 并且無典型的擴增曲線，判為陰性。
注意事項
1.試劑盒應(yīng)在-20℃以下保存和運輸。
2.本試劑盒僅用于科研檢測使用，操作人員必須經(jīng)過培訓(xùn)，試劑盒使用前請仔細(xì)閱讀說明書全文。
3.不要使用過期組分或者不同批次組分混合使用。
4.使用時盡量避免反復(fù)凍融，如凍融，應(yīng)不超過 3 次。
5.樣品采集和處理過程應(yīng)戴一次性手套，并及時更換，樣品間嚴(yán)禁交叉污染。
6.熒光 PCR 實驗嚴(yán)格分區(qū)操作，各區(qū)應(yīng)有專用的手套、移液器等，不得交叉使用，避免污染；工作 人員應(yīng)遵循單方向工作原則，各工作區(qū)相對隔離。
7.進(jìn)行熒光 PCR 實驗的工作桌面及相關(guān)物品應(yīng)定期用 1%次氯酸鈉、75%酒精、1mol/L 鹽酸依次滅菌 和消毒，或定期用紫外燈滅菌和消毒。