酸性蛋白酶測定試劑盒（分光光度法 50T/24S）
| 貨號 | SH0583 | 售價（元） | 696 |
| 規(guī)格 | 50T/24S | CAS號 |
- 產品簡介
- 相關產品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0583 |
酸性蛋白酶（Acid protease, ACP）試劑盒（分光光度法 50T/24S） |
50管/24樣 |
測定意義：
ACP是一種在酸性環(huán)境下催化蛋白質水解的酶。該酶主要用于酒精發(fā)酵、啤酒釀造、毛皮軟化、果酒澄清、醬油釀造、飼料等。
測定原理：
酸性條件下，ACP催化酪蛋白水解產生酪氨酸；在堿性條件下，酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍；鎢藍在680nm有特征吸收峰，通過測定其吸光度增加，來計算ACP活性。
組成：
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產品名稱 |
SH0583-50T/24S |
Storage |
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試劑一：液體一 |
1.5ml |
4℃ |
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試劑一：液體二 |
1ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
4℃避光 |
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試劑四：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑五：液體 |
10ml |
4℃ |
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標準品：液體 |
1ml |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑一的配制：臨用前按液體一：液體二：蒸餾水=76（μl）：17（μl）：18（ml）的比例配制，現配現用，如出現白色絮狀沉淀則不能用。
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加10 ml蒸餾水溶解。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加入20 ml試劑一，沸水浴中磁力攪拌溶解。（可在燒杯上蓋一層保鮮膜，注意觀察，避免水分全部蒸發(fā)，一般加熱15-30分鐘，該試劑為過飽和試劑，充分混勻后仍出現顆粒物不溶物不影響使用）。
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入50 ml蒸餾水溶解。
標準品：液體1ml×1支，0.25 μ mol/ml標準酪氨酸溶液，4℃保存。
自備儀器和用品：
可見分光光度計、水浴鍋、磁力攪拌器、可調式移液槍、1ml玻璃比色皿、1.5 ml EP管和蒸餾水。
粗酶液提取：
1. 試劑一的配制：見試劑的組成和配制。
2. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一）冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即粗酶液。
3. 血清或培養(yǎng)液：直接測定。
4. 細菌、真菌：按照細胞數量（104個）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1ml試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
測定操作：
1.分光光度計預熱30min，調節(jié)波長到680 nm，蒸餾水調零。
2.試劑二、試劑三和試劑四置于30℃水浴保溫30min。
3. 對照管：取一支EP管，加入100μl粗酶液，200μl試劑二，混勻后置于30℃水浴保溫10min；加入200μl試劑三，混勻后8000g， 4℃離心10min；取200μl上清液，加入新的EP管，再加入1000μl試劑四，200μl試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，于680nm測定光吸收，記為A對照管。
4. 測定管：取一支EP管，加入100μl粗酶液，200μl試劑三，混勻后置于30℃水浴保溫10min；加入200μl試劑二，混勻后8000g， 4℃離心10min；取200μl上清液，加入新的EP管，再加入1000μl試劑四，200μl試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，于680nm測定光吸收，記為A測定管。（注意與空白管不同，先加試劑三，后加試劑二）
5. 空白管：取EP管，加入200μl蒸餾水，1000μl試劑四，200μl試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，于680nm測定光吸收，記為A空白管。
6. 標準管：取EP管，加入200μl標準品，1000μl試劑四，200μl試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，于680nm測定光吸收，記為A標準管。
注意：空白管和標準管只需要測定一次。
ACP活性計算公式：
1. 按照樣本蛋白濃度計算
ACP活性單位定義：30℃每毫克蛋白每分鐘水解產生1nmol酪氨酸為1個酶活單位。
ACP活性（nmol/min /mg prot）= C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×V反總÷(Cpr×V1)÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）÷Cpr
2．按照樣本質量計算
ACP活性單位定義：30℃每克樣品每分鐘催化水解產生1 nmol酪氨酸為1個酶活單位。
ACP活性（nmol/min /g鮮重）=C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×V反總÷（W×V1÷V2）÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）÷W
3. 按照液體體積計算
ACP活性單位定義：30℃每毫升樣品每分鐘催化水解產生1nmol酪氨酸為1個酶活單位。
ACP活性（nmol/min/ml）=C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×V反總÷V1÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）
按照細胞數量計算
ACP活性單位定義：30℃每104個細胞每分鐘催化水解產生1nmol酪氨酸為1個酶活單位。
ACP活性（nmol/min /104 cell）=C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×V反總÷（細胞數量×V1÷V2）÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）÷細胞數量
C標準品：0.25 μ mol/ml標準酪氨酸溶液；V反總：酶促反應總體積，0.5ml；Cpr：粗酶液蛋白質濃度（mg/ml）；V1：加入反應體系中粗酶液體積（ml），0.1 ml；V2：提取液總體積（ml），1ml；T：催化反應時間（min），10min；W：樣品質量（g）。
注意事項：
1.試劑一按操作指示配制，用多少配多少，出現白色絮狀沉淀則不能用。
2.臨用前配制的試劑配置好后3天內使用完畢。