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測(cè)定意義：

血鈣幾乎全部存在于血漿中，所以血鈣主要指血漿鈣。血漿鈣有離子鈣和結(jié)合鈣兩種形式，其中只有離子鈣直接起生理作用，它與結(jié)合鈣處于動(dòng)態(tài)平衡，并受血液pH的影響。血鈣水平與多種重要的生理功能相關(guān)，過(guò)高或過(guò)低都會(huì)影響正常生理功能。本試劑盒用于檢測(cè)血液中游離鈣濃度。

測(cè)定原理：

在強(qiáng)堿溶液中游離鈣與GBHA反應(yīng)生成紅色鈣-GBHA復(fù)合物，在520nm有吸收峰；通過(guò)測(cè)定520nm吸光度，計(jì)算游離鈣濃度。

組成：

試劑三：液體×1瓶（空瓶，試劑自備）。取10ml試劑瓶。依次加入9ml無(wú)水甲醇和1ml丙酮，蓋緊混勻即可。

標(biāo)準(zhǔn)液：液體×1瓶，0.3μmol/ml，4℃保存。

自備儀器和用品：

可調(diào)式移液槍、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、石英比色皿/96孔板、無(wú)水甲醇、丙酮和蒸餾水。

血鈣濃度測(cè)定操作：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到520nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 空白管：取石英比色皿/96孔板，依次加入蒸餾水12 μl，試劑一50μl，混勻；再加入試劑二50μl，混勻；最后加入試劑三100μl，混勻；靜置5min后于520 nm測(cè)定吸光度A空白管。做一個(gè)空白管即可。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取石英比色皿/96孔板，依次加入標(biāo)準(zhǔn)液12μl，試劑一50 μl，混勻；再加入試劑二50μl，混勻；最后加入試劑三100μl，混勻；靜置5min后于520 nm測(cè)定吸光度A標(biāo)準(zhǔn)管。做一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管即可。

4. 測(cè)定管：取石英比色皿/96孔板，依次加入血液樣品12μl，試劑一50 μl，混勻；再加入試劑二50μl，混勻；最后加入試劑三100μl，混勻；靜置5min后于520 nm測(cè)定吸光度A測(cè)定管。記為A測(cè)定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

血鈣濃度計(jì)算公式：

血鈣含量(μmol /dL)= [C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×V樣品總

=30×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)

C標(biāo)準(zhǔn)液：0.3μmol/ml； V樣總：樣品總體積，1 dL=100ml。

注意事項(xiàng)：

1、宜早晨空腹采血，并且采血后應(yīng)該盡快完成測(cè)定。

2、靜置5分鐘后立即測(cè)定。

3、加試劑三后，應(yīng)該在30 min內(nèi)完成該管的測(cè)定。

4、最低檢出限為1mmol/L。