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多聚半乳糖醛酸酶（PG）檢測(cè)試劑盒(分光光度法50T/24S)
| 貨號(hào) | SH0508 | 售價(jià)（元） | 660 |
| 規(guī)格 | 50T/24S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱(chēng) |
規(guī)格 |
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SH0508 |
多聚半乳糖醛酸酶（PG）檢測(cè)試劑盒(分光光度法50T/24S) |
50管/24樣 |
測(cè)定意義：
多聚半乳糖醛酸酶（EC3.2.1.15）是一種細(xì)胞壁結(jié)合蛋白，可以催化果膠分子中α-(1,4)-聚半乳糖醛酸的裂解，參與果膠的降解，使細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)解體，導(dǎo)致果實(shí)軟化，與果實(shí)成熟、葉和花的脫落、病原物防御，細(xì)胞伸展發(fā)育以及木質(zhì)化有關(guān)，在植物抗病性和食品貯藏保鮮領(lǐng)域具有較高的研究?jī)r(jià)值。
測(cè)定原理：
多聚半乳糖醛酸酶水解果膠酸生成半乳糖醛酸，具有還原性醛基，與DNS試劑反應(yīng)生成紅棕色物質(zhì)，在540nm有特征吸收峰，測(cè)定540nm處吸光值變化可計(jì)算得多聚半乳糖醛酸酶活性。
試劑組成和配制：
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產(chǎn)品名稱(chēng) |
SH0508-50T/24S |
Storage |
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提取液：液體 |
50ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
20ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
25ml |
4℃避光 |
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說(shuō)明書(shū) |
一份 |
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自備儀器和用品：
天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 ml玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
酶液提?。?/span>
1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。16000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后16000g，4℃離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3、培養(yǎng)液：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
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對(duì)照管 |
測(cè)定管 |
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樣本（μl） |
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100 |
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煮沸樣本（μl） |
100 |
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試劑一（μl） |
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400 |
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蒸餾水（μl） |
400 |
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40℃水浴30min |
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試劑二（μl） |
500 |
500 |
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沸水浴5min，冰浴或自來(lái)水冷卻，蒸餾水調(diào)零，1ml玻璃比色皿測(cè)定540nm處吸光值A，△A=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。 |
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酶活性計(jì)算公式：
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y = 3.9642x - 0.008；R2 = 0.9996；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，mg/ml；y為吸光值。
1．按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH6.0條件下，每毫克蛋白每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。
PG活性（mg/h/mg prot）= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH6.0條件下，每克樣本每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。
PG活性（mg/h/g 鮮重）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷W
3．按液體體積計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH6.0條件下，每毫升培養(yǎng)液每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。
PG活性（mg/h/ml）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷V樣÷T=2.523×(ΔA+0.008)
4. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH6.0條件下，每104個(gè)細(xì)胞每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。
PG活性（mg/h/104cell）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷細(xì)胞數(shù)量
V反總：反應(yīng)總體積，0.5ml；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.1ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，0.5h。
注意事項(xiàng)：
煮沸樣本建議將樣本在沸水中煮沸10分鐘，以將酶徹底滅活。