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磷脂酶A2（PLA2）檢測(cè)試劑盒（微量法100T/48S）
| 貨號(hào) | SH0479 | 售價(jià)（元） | 8160 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0479 |
磷脂酶A2（PLA2）檢測(cè)試劑盒（微量法100T/48S） |
100T/48S |
測(cè)定意義：
磷脂酶A2（EC3.1.1.4）是磷脂sn-2位脂?；饷?，廣泛存在于動(dòng)植物組織、細(xì)菌、細(xì)胞核分泌物中，參與脂肪消化，精子成熟、細(xì)胞信號(hào)傳遞、脂質(zhì)過氧化修復(fù)、宿主反應(yīng)等生理過程，在控制體內(nèi)磷脂類物質(zhì)平衡、調(diào)節(jié)機(jī)體新陳代謝、參與疾病的病理進(jìn)程等方面發(fā)揮著及其重要的作用。
測(cè)定原理：
磷脂酶A2作用于2-硫代十六酰乙基磷酸膽堿（HEPC）產(chǎn)生游離巰基，與DTNB反應(yīng)生成黃色物質(zhì)，在412nm處有特征吸收峰。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0479-100T/48S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
20ml |
4℃避光 |
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試劑三：液體 |
5瓶 |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑三：液體×5瓶，-20℃避光保存。臨用前根據(jù)用量每瓶加入1.8ml試劑二充分混勻；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
自備儀器和用品：
天平、超速冷凍離心機(jī)、研缽、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板。
樣品處理：
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1ml提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心5min，取全部上清于4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于1ml試劑一。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后于4℃，10000g離心5min，取全部上清于4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于1ml試劑一。
3. 血清：直接測(cè)定。
4.
測(cè)定操作:
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對(duì)照管 |
測(cè)定管 |
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樣品（μl） |
20 |
20 |
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試劑二（μl） |
180 |
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試劑三（μl） |
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180 |
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充分混勻，37℃反應(yīng)10min，于微量石英比色皿/96孔板，蒸餾水調(diào)零，測(cè)定412nm處吸光值，記為A對(duì)照管和A測(cè)定管，△A=A測(cè)定管- A對(duì)照管 |
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酶活計(jì)算公式:
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
1．按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/mg prot）= △A÷（
×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
= 73.53×△A÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：每克組織每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/g 鮮重）= △A÷（
×d）×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T
= 73.53×△A÷W
3. 細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/104 cell）= △A÷（
×d）×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T
= 73.53×△A÷細(xì)胞數(shù)量
4按照液體體積計(jì)算
酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/ml）= △A÷（
×d）×V反總÷V樣÷T
= 73.53×△A
：TNB消光系數(shù)，13600L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，1ml；V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.1ml；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：加入提取液體積，1ml；
T：反應(yīng)時(shí)間，10min
b. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
1．按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/mg prot）= △A÷（
×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
=147.06×△A÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：每克組織每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/g 鮮重）= △A÷（
×d）×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T
= 147.06×△A÷W
3. 細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/104 cell）= △A÷（
×d）×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T
=147.06×△A÷細(xì)胞數(shù)量
4按照液體體積計(jì)算
酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/ml）= △A÷（
×d）×V反總÷V樣÷T
= 147.06×△A
：TNB消光系數(shù)，13600L/mol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V反總：反應(yīng)總體積，1ml；V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.1ml；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：加入提取液體積，1ml；
T：反應(yīng)時(shí)間，10min