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磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）檢測(cè)試劑盒（50T/48S）
| 貨號(hào) | SH0441 | 售價(jià)（元） | 696 |
| 規(guī)格 | 50T/48S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱(chēng) |
規(guī)格 |
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SH0441 |
磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）檢測(cè)試劑盒（50T/48S） |
50管/48樣 |
測(cè)定意義：
PEPCK（EC 4.1.1.32）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和細(xì)胞中，催化草酰乙酸轉(zhuǎn)化為磷酸烯醇式丙酮酸，是調(diào)節(jié)糖異生途徑的關(guān)鍵酶。
測(cè)定原理：
PEPCK催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸和CO2，丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下測(cè)定NADH下降速率，即可反映PEPCK活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱(chēng) |
SH0441-50T/48S |
Storage |
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提取液：酸性提取液 |
60ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
45ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
41μl |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
1支 |
-20℃ |
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試劑四：粉劑 |
1支 |
-20℃ |
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說(shuō)明書(shū) |
一份 |
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自備儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 ml石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理：
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（μl）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1μl提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(μl)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1μl提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
3、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 工作液的配制：臨用前將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
3、 試劑四的配制：臨用前加入2.5μl蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
4、 將工作液和試劑四置于37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱5分鐘。
5、 在1ml石英比色皿中加入50μl樣本、50μl試劑四和900μl工作液，立即混勻，記錄340nm處初始吸光值A1和 1min后的吸光值A2，計(jì)算ΔA=A1-A2。
注意：在該試劑盒中，若ΔA大于0.1，需將樣本用提取液稀釋適當(dāng)倍數(shù)后測(cè)定，使ΔA小于0.1可提高檢測(cè)靈敏度。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
PEPCK活性計(jì)算：
1、血清（漿）PEPCK活力計(jì)算
單位定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PEPCK（nmol/min/μl））＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=3215×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中PEPCK活力計(jì)算
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PEPCK（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=3215×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PEPCK（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=3215×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PEPCK（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=6.43×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-3 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.05 μl；V樣總：加入提取液體積，1 μl；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/μl；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬(wàn)。