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植酸酶(phytase)檢測(cè)試劑盒(微量法100T/48S)

貨號(hào) SH0434 售價(jià)(元) 1176
規(guī)格 100T/48S CAS號(hào)
  • 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
  • 相關(guān)產(chǎn)品

貨號(hào)

名稱(chēng)

規(guī)格

SH0434

植酸酶(phytase)檢測(cè)試劑盒(微量法100T/48S)

100T/48S

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定                                             

測(cè)定意義:

植酸酶(phytase)是催化植酸及其鹽類(lèi)水解為肌醇與磷酸(鹽)的一類(lèi)酶的總稱(chēng),屬磷酸單酯水解酶,它能將食品和飼料中植酸及其鹽轉(zhuǎn)化為可供有機(jī)體利用的有效磷,降低糞便中的磷含量,減輕對(duì)環(huán)境的污染,改善營(yíng)養(yǎng)成分的吸收和利用,因此具有極其廣泛的研究和應(yīng)用價(jià)值。

測(cè)定原理:

植酸酶在一定溫度和pH值條件下,水解底物植酸鈉生成無(wú)機(jī)磷與肌醇衍生物,無(wú)機(jī)磷在酸性環(huán)境中與鉬酸銨顯色劑反應(yīng)生成藍(lán)色復(fù)合物,在700nm處有特征吸收峰,根據(jù)700nm處吸光值變化可計(jì)算得植酸酶活性。

試劑組成和配制:

產(chǎn)品名稱(chēng)

SH0434-100T/48S

Storage

提取液:液體

100ml

4℃

緩沖液:液體

15ml

4℃

試劑一:粉劑

1

4℃

試劑二:液體

15ml

4℃

顯色劑:粉劑

8

4℃

說(shuō)明書(shū)

一份

試劑一:粉劑×1支,4℃保存,臨用前加緩沖液6ml配制,現(xiàn)用現(xiàn)配;用不完的試劑4℃保存一個(gè)月。

顯色劑:粉劑×8瓶,4℃保存,臨用前根據(jù)用量每瓶加0.4ml雙蒸水溶解,再加1.6ml試劑二混勻。

需自備儀器和用品:

天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋,超聲溶解器,回旋式振蕩器。

樣本處理:

1. 酶制劑:按照質(zhì)量(g):提取液體積(ml)1500~1000的比例(建議稱(chēng)取約0.001g,加入1ml提取液)加入提取液,在超聲波溶解器上溶解15min,再用回旋式振蕩器振蕩15min,待測(cè)。

2. 組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(ml)15~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g,加入1ml提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,在超聲波溶解器上溶解15min,再用回旋式振蕩器振蕩15min,4℃4000g離心10min,取上清待測(cè)。

3. 飼料樣品:飼料烘干粉碎,過(guò)40目篩,按照質(zhì)量(g):提取液體積(ml)15~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g,加入1ml提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,在超聲波溶解器上溶解15min,再用回旋式振蕩器振蕩15min,4℃,4000g離心10min,取上清待測(cè)。

4.   培養(yǎng)液等液體樣品,混勻直接測(cè)定。

測(cè)定步驟:

試劑名稱(chēng)(μl)

對(duì)照管

測(cè)定管

樣本μl

30

30

37℃溫育5min

緩沖液μl

120

 

試劑一μl

 

120

混勻,37℃溫育30min,95℃,10min終止反應(yīng),冷卻至室溫

顯色劑μl

150

150

混勻,37℃靜置15min,10000g,室溫,離心5min,取上清200μl,測(cè)定700nm處吸光值,△A=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

注意事項(xiàng)

1、顯色劑需要臨用前根據(jù)用量配制,每一瓶是13個(gè)樣本的用量,新配制的顯色劑若有顏色則已經(jīng)污染或者試劑過(guò)期,應(yīng)放棄使用。

2、ΔA線(xiàn)性范圍為0.01-1。

酶活性計(jì)算公式

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):y = 0.2764x + 0.0082R2 = 0.9998;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/ml),y為吸光值。

1. 按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義:在37℃pH5.5的條件下,每毫克蛋白每分鐘從5mmol/L的植酸鈉溶液中釋放出1μmol的無(wú)機(jī)磷為一個(gè)酶活力單位。

植酸酶活性(μmol/min/mg prot=△A-0.0082÷0.2764÷Cpr÷T =0.1206×△A-0.0082÷Cpr

2.按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義:在37℃,pH5.5的條件下,每克樣本每分鐘從5mmol/L的植酸鈉溶液中釋放出1μmol的無(wú)機(jī)磷為一個(gè)酶活力單位。

植酸酶活性(μmol/min /g 鮮重)=△A-0.0082÷0.2764÷W÷T =0.1206×△A-0.0082÷W

3. 培養(yǎng)液等液體樣品

酶活性定義:在37℃,pH5.5的條件下,每毫升液體每分鐘從5mmol/L的植酸鈉溶液中釋放出1μmol的無(wú)機(jī)磷為一個(gè)酶活力單位。

植酸酶活性(μmol/min /ml=△A-0.0082÷0.2764÷T =0.1206×△A-0.0082

                 

Cpr:樣本蛋白含量,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,30min。

b. 96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):y = 0.1382x + 0.0082,R2 = 0.9998;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/ml),y為吸光值。

1.按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義:在37℃,pH5.5的條件下,每毫克蛋白每分鐘從5mmol/L的植酸鈉溶液中釋放出1μmol的無(wú)機(jī)磷為一個(gè)酶活力單位。

植酸酶活性(μmol/min/mg prot=△A-0.0082÷0.1382÷Cpr÷T = 0.2412×△A-0.0082÷Cpr

2.按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義:在37℃pH5.5的條件下,每克樣本每分鐘從5mmol/L的植酸鈉溶液中釋放出1μmol的無(wú)機(jī)磷為一個(gè)酶活力單位。

植酸酶活性(μmol/min /g 鮮重)=△A-0.0082÷0.1382÷W÷T =0.2412×△A-0.0082÷W

3. 培養(yǎng)液等液體樣品

酶活性定義:在37℃,pH5.5的條件下,每毫升液體每分鐘從5mmol/L的植酸鈉溶液中釋放出1μmol的無(wú)機(jī)磷為一個(gè)酶活力單位。

植酸酶活性(μmol/min /ml=△A-0.0082÷0.1382÷T =0.2412×△A-0.0082

Cpr:樣本蛋白含量,mg/mlW:樣本質(zhì)量,gT:反應(yīng)時(shí)間,30min。

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