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支鏈/直鏈/總淀粉含量檢測(cè)試劑盒（微量法100T/96S)
| 貨號(hào) | SH0295 | 售價(jià)（元） | 3120 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
存儲(chǔ) |
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SH0295 |
支鏈/直鏈/總淀粉含量檢測(cè)試劑盒（微量法100T/96S) |
100T/96S |
按要求存儲(chǔ) |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
谷物淀粉中的直鏈淀粉最常見的測(cè)定方法是對(duì)直鏈淀粉的碘結(jié)合能力進(jìn)行電位法、電流法或比色法測(cè)量，從而形成直鏈淀粉-碘包合復(fù)合物。然而，這些方法存在不確定性。支鏈淀粉-碘復(fù)合物也會(huì)形成，它們會(huì)降低通過非比色法測(cè)量的游離碘的濃度，并且可能會(huì)在與比色法中的直鏈淀粉-碘復(fù)合物相似的波長(zhǎng)處吸收。
本試劑盒利用伴刀豆球蛋白A只與支鏈淀粉結(jié)合而不與直鏈淀粉結(jié)合的特性，使其分離，再用僅水解淀粉的酶復(fù)合物使淀粉水解為葡萄糖，通過檢測(cè)葡萄糖含量得到直鏈、 支鏈和總淀粉的含量。
保存條件：
未配制前在規(guī)定存儲(chǔ)條件下6個(gè)月內(nèi)有效，配制使用后在規(guī)定存儲(chǔ)條件下3個(gè)月內(nèi)有效。（各組分詳細(xì)儲(chǔ)存條件見瓶身）
試劑盒組成與配置：
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試劑名稱 |
儲(chǔ)存條件 |
SH0295-100T/96S |
配制過程 |
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試劑一 |
-20℃ |
粉劑 mg×1瓶 （ConA）
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用前甩幾下試劑落入底部，再加25ml的ConA溶劑將其溶解備用，用前可分為適當(dāng)大小的小份，并在使用之間儲(chǔ)存在-10℃以下的聚丙烯管中，如有可能，在使用過程中保持冷卻。（未配制時(shí)在-20℃穩(wěn)定2年以上，配制使用后在-20℃穩(wěn)定1~3個(gè)月） |
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試劑二 |
-20℃ |
粉劑 mg×1瓶
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用前甩幾下試劑落入底部，再將瓶中內(nèi)容物溶解在10 ml乙酸鈉緩沖液（100 mM，pH 4.5）中。分為適當(dāng)大小的等分試樣，并在使用期間儲(chǔ)存在-10℃以下的聚丙烯管中，如有可能，在使用過程中保持冷卻，（未配制時(shí)在-20℃穩(wěn)定2年以上，配制使用后在-20℃穩(wěn)定1~3個(gè)月） |
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試劑三 |
4℃ |
液體 500ml×1瓶 |
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試劑四 |
-20℃ |
粉劑 mg×1瓶
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用60ml試劑三緩沖液溶解試劑四中的內(nèi)容物，并將其定量轉(zhuǎn)移到含有剩余試劑三緩沖液的瓶子中。用鋁箔蓋住這個(gè)瓶子，以保護(hù)密封的試劑不受光照。（未配制時(shí)在2-5℃或＜-10℃下存放超過12個(gè)月，配制使用后在2-5℃或＜-20℃可穩(wěn)定1~3個(gè)月）
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標(biāo)準(zhǔn)品 |
4℃ |
液體5ml×1瓶
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D-葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（5 ml，1.0 mg/ml）
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1. 所需的儀器和用品：
2. 酶標(biāo)儀、196孔板、水浴鍋、可調(diào)式移液器、冰、 二甲基亞砜（DMSO,分析級(jí)）、乙醇、乙酸和蒸餾水
2. 需配試劑：
乙酸鈉緩沖液（100 mM，pH 4.5）：
向900 ml蒸餾水中添加5.9 ml冰醋酸（1.05 g/ml）。通過添加1 M（4 g/100 ml）氫氧化鈉溶液（需要大約30 ml），將pH值調(diào)節(jié)至pH 4.5，加入0.2g疊氮化鈉，調(diào)節(jié)體積至1L，室溫下穩(wěn)定2年以上。
濃縮ConA溶劑（600 mM，pH 6.4醋酸鈉緩沖液）：
稱取49.2 g無水乙酸鈉，175.5 g氯化鈉，0.5 g 二水合氯化鈣，0.7 g六水合氯化鎂和0.7 g 四水合氯化錳，后加入900ml蒸餾水。逐滴加入冰醋酸，調(diào)節(jié)pH至6.4（不能低于 6.4，否則重新配置），然后
用蒸餾水將其定容至1L。（在4℃下穩(wěn)定2周）
ConA溶劑（工作濃度）：用蒸餾水將30ml濃縮ConA溶劑稀釋至100ml（比例為3 ：7），現(xiàn)用現(xiàn)配。
淀粉含量測(cè)定：
1.準(zhǔn)確稱量淀粉或面粉樣品10mg，放入 旋蓋式樣品管中。(注意：每個(gè)批次都包括一個(gè)參考樣品，復(fù)制每五個(gè)測(cè)試樣品）
2.向試管中加入0.5ml DMSO，同時(shí)在渦旋混合器上以低速輕輕地?cái)嚢?，蓋上管子，在沸水浴中加熱，直到樣品完全分散（約1分鐘），確保沒有凝膠狀的淀粉塊存在。
3.在渦旋混合器上高速攪拌密封管中的內(nèi)容物，并將管子放入沸水中。渦流混合器，將試管置于沸水浴中，加熱15min，并用渦旋混合器間歇性高速攪拌。
4. 加熱結(jié)束后立即加入 1 ml 乙醇（95%(v/v)），在渦旋混合器上加入，防止結(jié)塊，在渦旋混合器上持續(xù)攪拌。再加入2 ml 乙醇（95%(v/v)），蓋上管子并倒置以混合，淀粉沉淀會(huì)形成，讓試管靜置 15min。（如果需要，可以過夜）
5. 將試管以2,000g離心5分鐘，棄去上清液，在紙巾上瀝干10min，確保所有的乙醇都已排空，將顆粒用于在隨后的直鏈淀粉和總淀粉測(cè)定中。
注意：每批樣品中都包括一個(gè)參考樣品，重復(fù)的每五份測(cè)試樣品都要重復(fù)。
6. 將1ml DMSO（輕輕渦旋混合）加入淀粉顆粒中。將試管放在沸水浴中15min，并不時(shí)攪拌，確保沒有凝膠狀的塊狀物。
7. 將試管從沸水浴中取出后，立即加入2ml ConA溶劑，充分混合，然后定量轉(zhuǎn)移試管。將試管內(nèi)容物定量轉(zhuǎn)移（用ConA溶劑反復(fù)洗滌）到25 ml容量瓶中，并定容至12.5ml，即為待測(cè)液。注：若是谷物樣本，第6步得到的溶液中有雜質(zhì)，需待自然冷卻 5min 后于3000rpm 室溫（25℃，低于 10℃會(huì)結(jié)凍）離心 5min，上清液備用；若是純淀粉樣本，第6步得到的 溶液呈澄清狀，不需離心自然冷卻 5min 備用（此步驟對(duì)于檢測(cè)結(jié)果是必要的）注意：該溶液應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行分析。
上機(jī)檢測(cè)：
（1）.酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，條件波長(zhǎng)至 510nm，空白檢測(cè)管調(diào)零。
（2）.直鏈淀粉上清液制備，在 EP 管中依次加入：
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試劑名稱 |
直鏈淀粉測(cè)定管（ml） |
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待測(cè)液 |
1ml |
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試劑一 |
0.25ml |
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反復(fù)顛倒混勻（不能渦旋）幾下，靜置 1 小時(shí)， 14000rpm 室溫離心 10min，上清液待測(cè) |
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上清液 |
0.5 ml |
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乙酸鈉緩沖液 （100 mM，pH 4.5） |
1.5 ml |
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95-100℃煮沸 5min 后，40℃溫育 5min， 觀察：有沉淀產(chǎn)生 |
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試劑二 |
0.05 ml |
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混勻，40℃ 水浴 30min后，2000g室溫離心5min， 上清液待測(cè) |
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（3）.總淀粉上清液制備，在 EP 管中依次加入：
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試劑名稱 |
總淀粉測(cè)定管（ml） |
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待測(cè)液 |
0.25 ml |
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乙酸鈉緩沖液 （100 mM，pH 4.5） |
2 ml |
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試劑二 |
0.05 ml |
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40℃ 水浴 30min 后待測(cè) |
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（4）.顯色反應(yīng)：
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試劑名稱 |
直鏈淀粉測(cè)定管（ml） |
總淀粉測(cè)定管（ml） |
空白管（僅做一次） |
標(biāo)準(zhǔn)管（僅做一次） |
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樣品 |
0.5ml（直鏈淀粉上清液） |
0.5 ml（總淀粉上清液） |
0.5 ml（乙酸鈉緩沖液（100 mM，pH 4.5）） |
0.05 ml（標(biāo)準(zhǔn)品）+0.45 ml（乙酸鈉緩沖液（100 mM，pH 4.5）） |
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顯色 （三和四混合液） |
2 ml |
2ml |
2 ml |
2 ml |
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混勻，40℃水浴避光20min，于 510nm 處讀取吸光值 A |
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反應(yīng)結(jié)束后將0.2ml液體轉(zhuǎn)移至96孔板中，于510nm處讀數(shù)；
計(jì)算：
直鏈淀粉 % (w/w)= 吸光度（直鏈淀粉） ×6.15 ×100
吸光度（總淀粉） 9.2 1
= 吸光度（直鏈淀粉） ×66.8
吸光度（總淀粉）
其中6.15和9.2分別是直鏈淀粉和總淀粉提取物的稀釋系數(shù)，淀粉提取物的稀釋系數(shù)。
注意事項(xiàng)：
1、二甲亞砜作為皮膚刺激物，因此應(yīng)謹(jǐn)慎使用。它通過皮膚吸收，會(huì)對(duì)皮膚和眼睛造成刺激。使用時(shí)穿戴防護(hù)品并避免濺出溶劑，盡可能在通風(fēng)柜中使用。
2. 刀豆球蛋白 A 通過吸入、皮膚接觸和攝入有害。影響可能是不可逆的并且可能涉及致畸作用。處理結(jié)晶 Con A 時(shí)穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)用品，處理含有 Con A 的溶液時(shí)佩戴手套。