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Na++K++-ATP酶檢測試劑盒（可見分光光度法50T/24S）
| 貨號 | SH0256 | 售價（元） | 252 |
| 規(guī)格 | 50T/24S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0256 |
Na+K+- ATP酶檢測試劑盒（可見分光光度法50T/24S） |
50管/24樣 |
測定意義：
Na+K+- ATP酶廣泛分布于植物、動物、微生物和細(xì)胞中，可催化ATP水解生成ADP和無機(jī)磷。
測定原理：
Na+K+-ATP酶分解ATP生成ADP及無機(jī)磷，通過測定無機(jī)磷的量來確定ATP酶活性。
試劑的組成和配制：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0256-50T/24S |
Storage |
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提取液：液體 |
50ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
10ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
5ml |
4℃ |
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試劑三：液體 |
5ml |
4℃ |
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試劑四：粉劑 |
1支×3 |
-20℃ |
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試劑五：液體 |
5ml |
4℃ |
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試劑六：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑七：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑八：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑九：液體 |
25ml |
室溫 |
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試劑十：10mmol/L標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 |
10ml |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑四：粉劑×3 支，-20℃保存。用時每支加1ml蒸餾水；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
試劑七：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入25ml蒸餾水，溶解后4℃保存一周；
試劑八：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入25ml蒸餾水，溶解后4℃保存一周；
0.5μmol/ml 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制：將貯備液 20倍稀釋，即取 0.1ml試劑十加1.9ml蒸餾水充分混勻。
定磷劑的配制：按H2O: 試劑七:試劑八:試劑九=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷劑應(yīng)為淺黃色。若無色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
樣品酶液的制備：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
操作步驟:
1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至660nm，蒸餾水調(diào)零。
2、酶促反應(yīng)（在EP管中加入下列試劑）：
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對照管 |
測定管 |
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試劑一（μl） |
130 |
90 |
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試劑二（μl） |
40 |
40 |
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試劑三（μl） |
40 |
40 |
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試劑四（μl） |
40 |
40 |
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試劑五（μl） |
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40 |
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樣本 （μl） |
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200 |
混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）準(zhǔn)確水浴10min;
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試劑六（μl） |
50 |
50 |
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樣本 （μl） |
200 |
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混勻，8000g，25℃離心10min，取上清液;
3、定磷(在1.5mlEP管中依次加入下列試劑)
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空白管 |
標(biāo)準(zhǔn)管 |
對照管 |
測定管 |
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0.5μmol/ml標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液（μl） |
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100 |
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上清液（μl） |
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100 |
100 |
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蒸餾水（μl） |
100 |
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定磷試劑（μl） |
1000 |
1000 |
1000 |
1000 |
混勻，室溫放置30 min，在 660nm處比色。
注意:
1、由于每一個樣都必須做對照，本試劑盒50管保證測 24份Na+K+-ATP酶。
2、此法具有微量、靈敏、快速的特點(diǎn)。所以對測定所用試管要求嚴(yán)格無磷。
3、空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要做一管。
計算:
1、血清（漿）Na+K+- ATPase活力的計算:
定義：每小時每毫升血清（漿）中Na+K+- ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無機(jī)磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP酶活力（μmol/h/ml）=[C標(biāo)準(zhǔn)管×V總]×（A測定管-A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷V樣÷T=7.5×（A測定管-A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中Na+K+- ATPase活力的計算：
（1）按蛋白濃度計算：
定義：每小時每毫克組織蛋白中Na+K+- ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無機(jī)磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP酶活力(μmol/h /mg)= [C標(biāo)準(zhǔn)管×V總]×（A測定管-A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷（Cpr×V樣）÷T =7.5×（A測定管-A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
定義：每小時每克組織中Na+K+-ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無機(jī)磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP酶活力(μmol/h/g)= [C標(biāo)準(zhǔn)管×V總]×（A測定管-A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷(W× V樣÷V樣總)÷T=7.5×（A測定管-A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：
定義：每小時每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞中Na+K+-ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無機(jī)磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP酶活力(μmol/h /104)= [C標(biāo)準(zhǔn)管×V總]×（A測定管-A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.015×（A測定管-A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）
C標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.5μmol/ml；V總：酶促反應(yīng)總體積，0.5ml；V樣：加入樣本體積，0.2ml ；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時間，1/6小時；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。