當(dāng)前位置： 首頁 - 產(chǎn)品目錄 - 生化試劑盒
順烏頭酸酶檢測試劑盒（分光光度法 50T/48S）
| 貨號(hào) | SH0249 | 售價(jià)（元） | 696 |
| 規(guī)格 | 50T/48S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
|
貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
|
SH0249 |
順烏頭酸酶（ACO）活性檢測試劑盒（分光光度法 50T/48S） |
50管/48樣 |
正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
順烏頭酸酶（aconitase），三羧酸循環(huán)中的酶，催化檸檬酸轉(zhuǎn)變?yōu)楫悪幟仕帷幟仕岜旧聿灰籽趸陧槥躅^酸酶作用下，通過脫水與加水反應(yīng)，使羥基由β碳原子轉(zhuǎn)移到α碳原子上，生成易于脫氫氧化的異檸檬酸，為進(jìn)一步的氧化脫羧反應(yīng)作準(zhǔn)備。
測定原理：
ACO催化檸檬酸轉(zhuǎn)化成異檸檬酸，異檸檬酸氧化脫羧將NAD+ 還原生成NADH，導(dǎo)致340nm處光吸收上升。
組成：
|
產(chǎn)品名稱 |
SH0249-50T/48S |
Storage |
|
試劑一：液體 |
50ml |
-20℃ |
|
試劑二：液體 |
10ml |
-20℃ |
|
試劑三：液體 |
1ml |
-20℃ |
|
試劑四：液體 |
60ml |
4℃ |
|
試劑五：液體 |
5ml |
4℃ |
|
試劑六：粉劑 |
1支 |
-20℃ |
|
試劑七：粉劑 |
1支 |
4℃ |
|
說明書 |
一份 |
|
試劑六：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前加3ml蒸餾水充分溶解；現(xiàn)配現(xiàn)用
試劑七：粉劑×1支，4°保存；臨用前加36ml試劑四充分溶解；
工作液：臨用前在36ml試劑七中加入3ml蒸餾水、3ml試劑四、3ml試劑五、3ml試劑六充分混勻
自備儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1ml石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理：
組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
1、 稱取約0.1g組織或收集500萬細(xì)胞，加入1ml試劑一和10μl 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、 將勻漿轉(zhuǎn)入離心管內(nèi)600g，4℃離心5min。
3、 棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
4、 上清液即胞漿提取物，可用于測定胞質(zhì)順烏頭酸酶活性。
5、 在步驟④的沉淀中加入200μl試劑二和2μl 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次），用于線粒體順烏頭酸酶活性測定。
測定步驟:
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 樣本測定
（1）將工作液，置于37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴10min；現(xiàn)配現(xiàn)用；若分次用將工作液分裝后于-20°保存，一星期內(nèi)可用。
（3）在1ml石英比色皿中加入100μl樣本900μl工作液，混勻，立即記錄340nm處20s時(shí)的吸光值A1和 3min20s后的吸光值A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。
ACO活性計(jì)算:
用石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活性單位。
ACO活性（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V樣) ÷T=536×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活性單位。
ACO（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=108×ΔA÷W
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活性單位。
ACO活性（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.722×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.001 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.1 ml；V樣總：加入提取液體積，0.202 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，3min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。