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β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-GA）檢測試劑盒（微量法100T/48S）
| 貨號 | SH0179 | 售價（元） | 1296 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0179 |
β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-GA）檢測試劑盒（微量法100T/48S） |
100管/48樣 |
測定意義：
β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷鍵水解。在植物染病或處于其他逆境條件下，可誘導細胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA活性測定廣泛應用于植物病理和逆境生理研究。
測定原理：
β-1,3-GA水解昆布多糖，內(nèi)切β-1,3-葡萄糖苷鍵，產(chǎn)生還原末端，通過測定還原糖生成速率來計算其酶活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0179-100T/48S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑二：液體 |
30ml |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入2ml蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存；
自備儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提取：
1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；12000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。12000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至550nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定（在1.5ml EP管中依次加入下列試劑）：
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試劑名稱（μl） |
測定管 |
對照管 |
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樣本 |
35 |
35 |
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蒸餾水 |
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35 |
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試劑一 |
35 |
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充分混勻，放入37℃水浴60 min
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試劑二 |
230 |
230 |
充分混勻，95℃水浴5min（蓋緊，防止水分散失），流水冷卻，取200μl至微量石英比色皿或96孔板中， 550nm處記錄各管吸光值A，如果吸光值大于2，可以用蒸餾水稀釋后測定（計算公式乘以相應稀釋倍數(shù)），ΔA=A測定-A對照。每個測定管需設一個對照管。
β-1,3-GA活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.0958x -0.0192；x為標準品濃度（mg/ml），y為吸光值。
2、血清（漿）β-1,3-GA活力的計算
單位的定義：每ml血清（漿）每小時產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。
β-1,3-GA(mg/h/ml)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷V1=10.438×(ΔA +0.0192)
3、細胞、細菌和組織中β-1,3-GA活力的計算
(1) 按蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每小時產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。
β-1,3-GA(mg/h/mg prot)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(V1×Cpr)=10.438×(ΔA +0.0192) ÷Cpr
(2) 按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每小時產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。
β-1,3-GA(mg/h/g 鮮重)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(W×V1÷V2)= 10.438×(ΔA +0.0192) ÷W
(3) 按細菌或細胞密度計算
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每小時產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。
β-1,3-GA(mg/h /104 cell)= [( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0208×(ΔA+0.0192)
V1：加入反應體系中樣本體積，0.035ml；V2：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.0479x -0.0192；x為標準品濃度（mg/ml），y為吸光值。
2、血清（漿）β-1,3-GA活力的計算
單位的定義：每ml血清（漿）每小時產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。
β-1,3-GA(mg/h/ml)=[( ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷V1=20.876×(ΔA +0.0192)
3、細胞、細菌和組織中β-1,3-GA活力的計算
(1) 按蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每小時產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。
β-1,3-GA(mg/h/mg prot)= [(ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(V1×Cpr)=20.876×(ΔA +0.0192) ÷Cpr
(2) 按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每小時產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。
β-1,3-GA(mg/h/g 鮮重)= [(ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(W×V1÷V2)= 20.876×(ΔA +0.0192) ÷W
(3) 按細菌或細胞密度計算
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每小時產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。
β-1,3-GA(mg/h /104 cell)= [( ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0416×(ΔA+0.0192)
V1：加入反應體系中樣本體積，0.035ml；V2：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。