谷氨酰胺合成酶檢測試劑盒 (可見分光50T/24S)
| 貨號 | SH0145 | 售價（元） | 360 |
| 規(guī)格 | 50T/24S | CAS號 |
- 產品簡介
- 相關產品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0145 |
谷氨酰胺合成酶（Glutamine synthetase，GS）試劑盒 (分光光度法50T/24S) |
50管/24樣 |
測定意義：
GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物體內氨同化的關鍵酶之一，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺，不僅可以防止過多的銨離子對生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要儲存和運輸形式。
測定原理：
GS在ATP和Mg2+存在下，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺進一步轉化為γ─谷氨?；惲u肟酸，在酸性條件下形成的絡合物在540nm處有最大吸收峰，可用分光光度計測定。
組成：
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產品名稱 |
SH0145-50T/24S |
Storage |
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提取液 |
30ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
12ml |
-20℃ |
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試劑二：液體 |
12ml |
-20℃ |
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試劑三：粉劑 |
2瓶 |
-20℃ |
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試劑四：液體 |
15ml |
4℃ |
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說明書 |
1份 |
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試劑一臨用前37℃預熱20min，充分混勻，如有沉淀，靜置10min，取上清待用。
試劑二臨用前37℃預熱20min，充分混勻，如有沉淀，靜置10min，取上清待用。
試劑三用時每瓶加入5ml蒸餾水充分溶解待用。
自備儀器和用品：
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
樣本測定的準備：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至540nm，蒸餾水調零。
2、在EP管中加入下列試劑：
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試劑名稱（μl） |
測定管 |
對照管 |
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試劑一 |
400 |
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試劑二 |
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400 |
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試劑三 |
175 |
175 |
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樣本 |
175 |
175 |
混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）準確水浴30min
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試劑四 |
250 |
250 |
混勻，25℃室溫靜置10min后，5000g，25℃離心10min，取上清液測定540nm處的吸光值A。△A=A測定管-A對照管。每個測定管需設一個對照管。
GS活力單位的計算：
標準曲線：y = 0.8348x + 0.0008，R2 = 0.9999
1、血清（漿）GS活性
單位定義：每ml血清（漿）在每ml反應體系中每小時產生1μmol γ-谷氨酰基異羥肟酸定義為一個酶活力單位。
計算公式：
GS（μmol/h/ml）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反總÷V樣÷T=10.268×ΔA
2、組織、細菌或細胞GS活性
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白在每ml反應體系中每小時產生1μmol γ-谷氨?；惲u肟酸定義為一個酶活力單位。
GS（μmol/h/mg prot）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反總÷(Cpr×V樣)÷T
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織在每ml反應體系中每小時產生1μmol γ-谷氨?；惲u肟酸定義為一個酶活力單位。
GS（μmol/h/g 鮮重）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷T=10.268×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算
單位定義：每1萬個細菌或細胞在每ml反應體系中每小時產生1μmol γ-谷氨?；惲u肟酸定義為一個酶活力單位。
GS（μmol/h/104 cell）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.021×ΔA
V反總：反應體系總體積，0.75ml； V樣：加入樣本體積，0.175ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，30 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。