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多功能氧化酶（MFO）檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/96S）
| 貨號(hào) | SH0080 | 售價(jià)（元） | 2400 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0080 |
多功能氧化酶（MFO）檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/96S） |
100T/96S |
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
多功能氧化酶又稱混合功能氧化酶，可產(chǎn)生降解反應(yīng)，可使原化學(xué)物質(zhì)變?yōu)榈投镜幕驘o毒的物質(zhì)從體內(nèi)排出；還可產(chǎn)生激活反應(yīng)，可使原化學(xué)物質(zhì)轉(zhuǎn)化為具有親電子性質(zhì)，導(dǎo)致毒性增強(qiáng)，成為致突變物或終致癌物。近年來對(duì)混合功能氧化酶系與外源性化學(xué)物質(zhì)相互作用的深入研究，對(duì)于從分子生物學(xué)水平上進(jìn)一步了解外源性化學(xué)物質(zhì)的毒作用具有重要意義。
測(cè)定原理：
MFO催化對(duì)硝基苯甲醚產(chǎn)生對(duì)硝基苯酚，在400nm下有特征吸光值。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0080-100T/96S |
Storage |
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提取液：液體 |
120ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
24ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
3管 |
4℃ |
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試劑三：液體 |
24ml |
4℃ |
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試劑四：液體 |
64ml |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑二：粉劑×3管，-20℃保存；臨用前取一管加入1.5ml水溶解，現(xiàn)配現(xiàn)用。
自備儀器和用品：
酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰、蒸餾水、氯仿。
粗酶液提取：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液（ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。12000g 4℃離心20min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至400nm。
2、在EP管中依次加入如下試劑
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試劑名稱（μl） |
測(cè)定 |
空白 |
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試劑一 |
200 |
200 |
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試劑二 |
40 |
40 |
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提取液 |
160 |
360 |
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樣本 |
200 |
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混勻，37℃水浴30min |
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試劑三 |
200 |
200 |
分別加入1000μl氯仿，充分混勻萃取，靜置10min，取下層氯仿層0.6ml至新的EP管中。再加入試劑四0.6ml，充分混勻萃取，取上層水相0.2ml于96孔板中，400nm下測(cè)定吸光值A測(cè)定與A空白，△A=A測(cè)定-A空白。空白管只需測(cè)一管。
MFO活性計(jì)算:
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0119x + 0.0021，R2 = 0.9997；y，吸光度；x,標(biāo)準(zhǔn)品濃度，單位nmol/ml。
（1）按樣本質(zhì)量計(jì)算
單位定義：每g樣本每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。
MFO（nmol/min/g 鮮重）=（△A-0.0021）÷0.0119×V總÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=8.4×（△A-0.0021）÷W
（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。
MFO（nmol/min/mg prot）=（△A-0.0021）÷0.0119×V總÷(V樣×Cpr)÷T
=8.4×（△A-0.0021）÷Cpr
V總：最終萃取液體積，0.6 ml；V樣：反應(yīng)中樣品體積，200μl；T：反應(yīng)時(shí)間，30min；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml。