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過氧化氫（H2O2）檢測試劑盒（分光光度法50T/48S）
| 貨號(hào) | SH0019 | 售價(jià)（元） | 240 |
| 規(guī)格 | 50T/48S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0019 |
過氧化氫含量（H2O2）檢測試劑盒（分光光度法50T/48S） |
50管/48樣 |
正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
H2O2是生物體內(nèi)最常見的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化產(chǎn)生，由CAT和POD等催化降解。H2O2不僅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互轉(zhuǎn)化的樞紐。一方面，H2O2可以直接或間接地氧化細(xì)胞內(nèi)核酸，蛋白質(zhì)等生物大分子，并使細(xì)胞膜遭受損害，從而加速細(xì)胞的衰老和解體；另一方面H2O2也是許多氧化應(yīng)急反應(yīng)中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。
測定原理：
H2O2與硫酸鈦生成黃色的過氧化鈦復(fù)合物，在415nm有特征吸收。
試劑的組成和配制：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0019-50T/48S |
Storage |
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試劑一：丙酮 |
60ml（自備） |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑三：液體 |
15ml |
4℃ |
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試劑四：液體 |
60ml |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入10ml濃鹽酸充分溶解備用。用不完的試劑4℃保存；(溶解時(shí)間較長，約30min，可40℃-60℃加熱溶解，務(wù)必提前準(zhǔn)備)
自備儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 ml玻璃比色皿、丙酮60ml、濃鹽酸10ml、研缽和冰。
H2O2提取：
1、細(xì)菌或細(xì)胞樣品的制備：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；用試劑一定容至1ml；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、 組織樣品的制備：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿；轉(zhuǎn)移至EP管中，用試劑一定容至1ml，8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至415nm，蒸餾水調(diào)零。
2、將試劑二、三和四37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。
3、在EP管中按順序加入下列試劑
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試劑名稱（μl） |
測定管 |
對(duì)照管 |
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樣本 |
吸取的量的為全部上清液 |
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試劑一 |
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1000 |
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試劑二 |
100 |
100 |
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試劑三 |
200 |
200 |
4000g，25℃離心10min，棄上清，留沉淀
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試劑四 |
1000 |
1000 |
加入試劑四溶解沉淀后，室溫靜置5min，倒入比色皿中，測定415nm處吸光值A。對(duì)照管只要做一次即可。計(jì)算ΔA＝A測定-A對(duì)照。
注意事項(xiàng):
1、由于試劑一易揮發(fā)，試劑一必須先預(yù)冷再加，研磨時(shí)必須在冰上研磨。
2、本試劑盒中試劑的揮發(fā)性較高，請(qǐng)帶一次性手套和口罩。
H2O2含量計(jì)算：
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸曲線，y = 0.7488x + 0.0006 (x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，μmol/ml；y為ΔA)。
2、血清（漿）中H2O2含量的計(jì)算：
H2O2含量（μmol/ml）＝(ΔA-0.0006) ÷0.7488=1.34×(ΔA-0.0006)
3、細(xì)菌、細(xì)胞或組織中H2O2含量計(jì)算
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
H2O2含量(μmol/mg prot)= [ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(V1×Cpr)= 1.34×(ΔA-0.0006)÷Cpr
需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
H2O2含量(μmol/g鮮重)= [ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(W ×V1÷V2)= 1.34×(ΔA-0.0006)÷W
(3 ) 按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
H2O2含量(μmol/104)= [ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0027×(ΔA-0.0006)
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，1ml；V2：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬。
注意：標(biāo)曲線性范圍為0.1μmol/ml到2μmol/ml，吸光度ΔA線性范圍為0.07-1.5，若ΔA超過1.5則需要稀釋，計(jì)算公式乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。