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過氧化氫酶（CAT）檢測試劑盒（紫外吸收法）（微量法100T/96S）
| 貨號 | SH0006 | 售價（元） | 216 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0006 |
過氧化氫酶（CAT）檢測試劑盒（紫外吸收法）（微量法100T/96S） |
100T/96S |
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是最主要的H2O2清除酶，在活性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用。
測定原理：
H2O2在240nm下有特征吸收峰，CAT能夠分解H2O2，使反應(yīng)溶液240nm下的吸光度隨反應(yīng)時間而下降，根據(jù)吸光度的變化率可計算出CAT活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0006-100T/96S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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工作液：液體 |
24ml |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研缽、冰和蒸餾水
粗酶液提?。?/span>
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、 分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至240nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 測定前將CAT檢測工作液在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。
3、 準備96孔UV板一塊（非普通酶標板，普通酶標板只能透過可見光，不能透過紫外光，檢測波長小于340nm務(wù)必使用UV板）。
4、 在微量石英比色皿或96孔UV板中加入10μl樣本和190μl工作液，混勻，記錄240nm下初始吸光值A1和1min后的吸光值A2。計算ΔA＝A1-A2。
注意事項：出現(xiàn)負值怎么辦？
首先檢查吸光值是否超過3，如果超過3很可能是沒有用UV板，請換用UV板。如果未超過3，仍然出現(xiàn)負值則檢查反應(yīng)過程是否產(chǎn)生氣泡，氣泡多說明酶活性太高，氣泡影響產(chǎn)生了負值，可以將樣本用提取液稀釋10倍后再檢測。如果稀釋樣本或反應(yīng)體系沒有產(chǎn)生氣泡仍然出現(xiàn)較小的負值，說明該樣本測不到該酶活。
CAT活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清（漿）CAT活力的計算:
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。
CAT(nmol/min/ml)= [ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=459×ΔA
2、組織、細菌或細胞中CAT活力計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。
CAT(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=459×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。
CAT(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T=459×ΔA÷W
（3） 按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。
CAT(nmol/min/104 cell)＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T =0.917×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：H2O2摩爾消光系數(shù)，4.36×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；500：細胞或細菌總數(shù)，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、血清（漿）CAT活力的計算:
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。
CAT(nmol/min/ml)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=918×ΔA
2、組織、細菌或細胞中CAT活力計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。
CAT(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T =918×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。
CAT(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T=918×ΔA÷W
（3） 按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。
CAT(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=1.836×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：H2O2摩爾消光系數(shù)，4.36×104 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；500：細胞或細菌總數(shù)，500萬。