AapCas12b Lyophilized Beads(SCREW CAP TUBES)
| 貨號 | V32118E | 售價（元） | 6650 |
| 規(guī)格 | 100ug | CAS號 |
- 產品簡介
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產品描述
AapCas12b 核酸酶(又名 C2c1)是由 tracrRNA-crRNA(或 sgRNA)介導的 DNA 核酸內切酶，在靶標雙鏈 DNA 存在 PAM (TTN) 序列的情況下，特異地剪切靶標雙鏈 DNA，使 DNA 雙鏈斷裂并生成粘性末端。而 AapCas12b 特異地剪切單鏈 DNA 靶標不依賴 PAM 序列。此外，雙鏈或單鏈 DNA 靶標均能激活 AapCas12b 的反式剪切活性(即旁路剪切活性/附屬剪切活性)，即當 AapCas12b 酶與 sgRNA、靶標 DNA 結合形成三元 復合物后，便會被激活針對非特異序列 ssDNA 的反式剪切活性，將體系中的任意序列 ssDNA 切碎。 AapCas12b 來源于嗜酸耐熱菌 Alicyclobacillus acidiphilus，最佳剪切反應溫度為 60℃，因此更適用于與 LAMP 聯用，開發(fā)“一步法”恒溫擴增/CRISPR-Cas 檢測體系。
本產品將無甘油 AapCas12b 核酸酶凍干，可用于常溫運輸及保存，使用配套的凍干 Cas 酶復溶液復溶 后，具有與本公司非凍干型 AapCas12b (C2c1) Nuclease（#32118）同等的反應活性。本產品包括可用于單 個反應的酶凍干粉及凍干球等多種凍干形態(tài)，滿足不同下游反應體系構建的需求。
產品組分
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組分 |
V32118E-01 |
V32118E-02 |
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● AapCas12b Lyophilized Beads(SCREW CAP TUBES) |
100 μg |
100 μg × 5 |
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● AapCas12b Lyophilized Beads(PENICILLIN VIALS) |
200 μL |
1 mL |
· 建議使用 150 μL 復溶液復溶一支 100 μg 的 AapCas12b 凍干粉，復溶后酶濃度為 5 μM，即 5 pmol/μL。
保存條件
本產品常溫保存及運輸；復溶后于-20℃儲存，避免反復凍融。
實驗流程
1.冰上制備如下CRISPR反式剪切反應體系：
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組分 |
體積 |
終濃度 |
| 10 × HOLMES Buffer 1（#32005） |
2 μL |
1 × |
| 5 μM AapCas12b（C2c1）Nuclease a |
0.5 μL |
250 μM |
| 10 μM sgRNA |
0.5 μL |
250 μM |
| 1 μM Target DNA | 0.5 ~ 5 μL |
25 ~ 250 μM |
| 10 μM HOLMES ssDNA Reporter（#31101） | 0.5 μL |
250 μM |
| Nuclease-free Water |
Up to 20 μL |
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a.V32108E 系列 LbCas12a 每管含有 100 μg 的 LbCas12a 凍干粉，建議每管加入 136 μL 復溶液，復溶后酶濃度為 5 μM，即 5 pmol/μL。
2.立即放入實時熒光定量 PCR儀檢測熒光信號，60℃反應，每 30 sec采集一次熒光信號。
實驗結果
注意事項
2. 為防止 RNase 污染，請保持實驗區(qū)干凈整潔，操作時需穿戴干凈的手套、口罩，實驗所用槍頭、離心管等耗材均為 RNase-free。
3. 本產品僅包含 Cas 酶，CRISPR 反應體系中所需的 Target DNA 和 crRNA 需要自己制備，10 × HOLMES Buffer 1 (#32005)和 10 μM HOLMES ssDNA Reporter (#31101)推薦從 TOLOBIO 選購。
4. 復溶后的 AapCas12b 需在冰上配制反應體系，且使用后立即將酶置于-20℃保存 (-20℃可保存一個月)。
5. 本產品僅供科研使用。