miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop)
| 貨號 | 22112 | 售價（元） | 600 |
| 規(guī)格 | 50 rxn | CAS號 |
- 產品簡介
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產品簡介
miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit（by stem-loop）是miRNA cDNA第一鏈合成的專用試劑盒(莖環(huán)法)。其中包含42℃, 2min的基因組DNA去除步驟，操作簡便，可快速消除基因組DNA的干擾。本產品包含新一代逆轉錄酶ToLoScript III RTase以及針對miRNA的基因組去除與逆轉錄反應優(yōu)化的最適緩沖液，從而有利于miRNA特異性逆轉錄產物的生成。建議使用ToloBio通用型2 × Q3 SYBR qPCR Master Mix (Universal，#22204)進行cDNA產物后續(xù)定量。
產品優(yōu)勢
? 優(yōu)異的線性關系：在一定的模板區(qū)間內具有優(yōu)異線性關系，模板含量最低檢測限可低至pg級。
實驗案例
以293T細胞的miRNA的10倍稀釋梯度（1μg~10 pg）為模板，使用Tolobio#22112以及Supplier A，按照各自說明書推薦程序進行逆轉錄反應，得到的cDNA使用2 × Q3 SYBR qPCR Master Mix(Tolobio #22204)擴增hsa-miR-19a基因。實驗結果顯示，在一定的模板區(qū)間內，本產品相比于同類產品具有優(yōu)異的線性關系。
實驗流程
1.基因組DNA去除
組分
體積
5 × miR gDNA Erase-Out Mix
2 μL
Total RNA/miRNA
x μL(10 pg ~ 1 μg)
RNase-free ddH2O
Up to 10 μL
用移液器吹打混勻后短暫離心。
1.2 去除gDNA反應程序
溫度
時間
42℃
2 min
2.第一鏈cDNA合成
2.1第一鏈cDNA合成反應體系
組分
體積
第1步的反應液
10 μL
Stem-loop Primer (2 μM)
1 μL
10 × miR RT Buffer (stem)
2 μL
ToLoScript III miR Enzyme Mix (stem)
1 μL
RNase-free ddH2O
Up to 20 μL
用移液器吹打混勻后短暫離心。
2.2第一鏈cDNA合成反應程序
溫度
時間
25℃
5 min
50℃
15 min
85℃
2 min
逆轉錄產物可直接進行下游qPCR檢測。若短期內不進行下游實驗，可-20℃保存。若需長期保存，建議分裝后保存于-80℃，避免反復凍融。
產品組成
組分
22112 (50 rxn)
● 5 × miR gDNA Erase-Out Mix
100 μL
● 10 × miR RT Buffer (stem) a
100 μL
● ToLoScript III miR Enzyme Mix (stem) b
50 μL
○ RNase-free ddH2O
1 mL
a.包含dNTP；
保存條件
-20℃保存，≤ 0℃運輸；
? 最適的反應體系：含有針對新一代逆轉錄酶ToLoScript III RTase，以及miRNA的基因組去除與逆轉錄反應優(yōu)化的最適緩沖液，更有利于miRNA特異性逆轉錄產物的生成。
1.1去除gDNA反應體系
室溫融化5 × miR gDNA Erase-Out Mix、10 × miR RT Buffer (stem)及ToLoScript III miR Enzyme Mix (stem) 后置于冰上，在RNase-free離心管中配制如下反應體系：
b.包含ToLoScript III RTase, RNase inhibitor。