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產(chǎn)品簡介

哺乳動(dòng)物發(fā)光，一般是將螢火蟲熒光素酶(firefly luciferase)基因整合到需觀察細(xì)胞的染色體DNA上，以表達(dá)熒光素酶，培養(yǎng)出能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株，當(dāng)細(xì)胞分裂、轉(zhuǎn)移、分化時(shí)，熒光素酶也會得到持續(xù)穩(wěn)定的表達(dá)。標(biāo)記后的熒光素酶只有在活細(xì)胞內(nèi)才會產(chǎn)生發(fā)光現(xiàn)象，并且發(fā)光強(qiáng)度與標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)目呈線性相關(guān)。除螢火蟲熒光素酶外，有時(shí)也會用到海腎熒光素酶(renilla luciferase)。二者的底物不同，螢火蟲熒光素酶的底物是熒光素(D-luciferin,常見鉀鹽或者鈉鹽)。二者的發(fā)光波長也不一樣，前者發(fā)光波長在540-600 nm,后者發(fā)光波長在460-540nm。熒光素所發(fā)的光更容易透過組織，在體內(nèi)代謝較慢，而且特異性好。所以大部分活體成像實(shí)驗(yàn)采用螢火蟲熒光素酶基因作為報(bào)告基因。

外觀：淡黃色粉末
溶解性：water 50mg/ml;
純度：>98%,實(shí)測大于99%
儲存條件：避光-20℃儲存

產(chǎn)品用途：D-Luciferin作為熒光素酶的底物，存在于多種發(fā)光生物體中。在ATP和熒光素酶的催化作用下，熒光素被氧化，產(chǎn)生藍(lán)綠色的光(560nm)，當(dāng)?shù)孜镞^量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)。編碼熒光素酶的Luc基因是植物、細(xì)菌、哺乳動(dòng)物細(xì)胞的常見報(bào)告基因。由于沒有背景干擾，因此可以很容易檢測出低至0.02 pg水平的熒光素酶。

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熒光素鉀鹽操作方法

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一：體外生物發(fā)光試驗(yàn)熒光素試劑的制備
材料
—D-熒光素，鉀鹽D-luciferin，potassium salt?
—無菌純水
—完全培養(yǎng)基（自行配置）
步驟
1. 用無菌水制備200X熒光素原液（30mg/ml），輕輕顛倒搖動(dòng)至熒光素完全溶解?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。
2. 將D-luciferin，potassium salt?溶解于預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基中制備成濃度為150 μg/ml的工作液。用組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲存液，配置工作液(終濃度150μg/mL)。
3. 去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基。
4. 圖像分析前，向細(xì)胞培養(yǎng)板中添加1×熒光素工作液，然后進(jìn)行圖像分析。
—注射器濾膜過濾除菌，0.2 μ m
*提示：成像前在37℃下對細(xì)胞進(jìn)行短時(shí)間孵育可增強(qiáng)信號。

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二：活體成像分析
材料
—D-熒光素，鉀鹽?D-luciferin，potassium salt?
—D-PBS,不含鈣、鎂（細(xì)胞培養(yǎng)級）
1：用無菌的DPBS（w/o Ca2+ ;Mg2+）配制D-熒光素鉀鹽工作液（15mg/ml），0.2μm濾膜過濾除菌。混勻后立即使用或分裝于-20℃或-80℃凍存，避免反復(fù)凍融。一旦使用，放到4℃解凍，保持冰冷且避光。
2：注射量取決于注射方式，具體如下：

3： 注射入體內(nèi)10-20 min（待光信號達(dá)到最強(qiáng)穩(wěn)定平臺期），再進(jìn)行成像分析。
注意：建議對每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，從而確定最高信號檢測時(shí)間和信號平臺期。保存和操作的過程中都要避光。另外水溶性儲存液過濾除菌后，可以-20℃或-80℃分裝凍存，避免反復(fù)凍融。如果有條件，對儲存液充氮?dú)饣驓鍤猓ǚ乐寡趸?，穩(wěn)定性和保存時(shí)間更長，長達(dá)1年。?注射方式，動(dòng)物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，確定最佳信號平臺期和最佳的檢測時(shí)間。熒光素鉀鹽和熒光素鈉鹽應(yīng)用上沒有差別，兩者的差別在于物理性狀上如外形和溶解性。鈉鹽的水溶性高于鉀鹽。從目前發(fā)表的文獻(xiàn)來看，鉀鹽的使用率遠(yuǎn)高于鈉鹽，尤其是體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。兩者功效相同。 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。