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產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品簡介

低密度脂蛋白（Low Density Lipoprotein，簡稱為LDL）是通過脂蛋白酯酶的水解作用，脫去極低密度脂蛋白（VLDL）中的甘油三脂，釋放游離脂肪酸轉(zhuǎn)化而來的。因甘油三酯的去除使得膽固醇所占比例提高，增加顆粒本身密度，從而得到LDL。LDL與脊椎細(xì)胞表面的受體特異性結(jié)合，然后通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用將膽固醇運(yùn)輸?shù)饺砀魈幖?xì)胞。因此，LDL可以用來研究受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用過程，尤其是在動(dòng)脈粥樣硬化等疾病中，血漿來源的LDL還可用于研究LDL在功能和代謝中的氧化作用。

紅色熒光標(biāo)記人源低密度脂蛋白（Human DiI-LDL）是標(biāo)記熒光探針Dil（1,1-dioctadecyl-3,3,3,3- tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate）的LDL，可以用來觀察培養(yǎng)細(xì)胞的LDL結(jié)合位點(diǎn)，或篩選LDL受體表達(dá)缺陷型細(xì)胞突變株。也可以通過流式細(xì)胞術(shù)評(píng)估細(xì)胞受體水平，或檢測組織內(nèi)的受體水平。 DiI-LDL是研究細(xì)胞內(nèi)吞作用非常好的標(biāo)記物。

warbio提供的Human DiI-LDL為無菌包裝，可以直接稀釋使用。除提供DiI-LDL，我們還提供不帶標(biāo)記的LDL，以及修飾化的LDL如乙酰化LDL（Ac-LDL），以及氧化修飾的LDL（Ox-LDL）。

產(chǎn)品屬性

濃度：0.8-3.0 mg/ml

外觀：乳狀液體

吸光度比例：Dil/Protein=555nm/275nm=1.30

緩沖液組分：0.02 mM EDTA in PBS, pH 7.4

運(yùn)輸與保存方法：冰袋運(yùn)輸；4℃無菌，建議避光，收到貨后穩(wěn)定保存6周。切忌凍存！

制備與操作方法

純化的人健康血漿來源的LDL直接標(biāo)記上DiI熒光探針，然后通過超速離心以及透析的方法純化回收標(biāo)記產(chǎn)物，并濾膜過濾除菌。純化的DiI-LDL溶于含0.02 mM EDTA的PBS，pH 7.4中。

操作步驟

a)  無菌條件下，將DiI-LDL用細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋至25-50 μg/ml。

b)  加入活細(xì)胞內(nèi)，37℃培養(yǎng)4-5小時(shí)。

c)  孵育結(jié)束，吸去含有Human DiI-Ox-LDL的培養(yǎng)基，并用無探針的培養(yǎng)基洗幾次。

d)  根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測。

1)  熒光顯微鏡觀察

采用標(biāo)準(zhǔn)的羅丹明激發(fā)：發(fā)射濾光片（或建議使用波長為：Ex/Em=549nm/565nm）；若需要請(qǐng)使用含3%甲醛的PBS進(jìn)行固定，切勿使用甲醇或丙酮固定，因Dil易溶于有機(jī)溶劑。注：需設(shè)陽性細(xì)胞以做對(duì)照。

2）細(xì)胞分選（流式細(xì)胞術(shù)）

胰蛋白酶處理細(xì)胞或者加入EDTA制成單細(xì)胞懸液，選用合適的已標(biāo)記純化細(xì)胞用作陰性和陽性對(duì)照，從而進(jìn)行流式分選設(shè)門（gate）。（建議使用波長為Ex: 488/514/549nm; Em: 565nm）。

注意事項(xiàng)

本品的稀釋工作液極不穩(wěn)定，建議即配即用；

長期貯存可能會(huì)有沉淀析出，屬于正常現(xiàn)象，低速離心2 min去除沉淀即可使用；

LDL與LDL受體的結(jié)合需要Ca2+和Mn2+的參與，過量EDTA的存在會(huì)抑制其結(jié)合；

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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