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產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡介

LysoSensor?系列探針是主要對(duì)活細(xì)胞中的酸性區(qū)室（如溶酶體、頂體精子）動(dòng)態(tài)合成和功能進(jìn)行研究的一類熒光探針，該類探針的染色具有向酸性，可通過質(zhì)子化作用在酸性細(xì)胞器內(nèi)累積。該類探針的這種質(zhì)子化作用還可解除染料的熒光淬滅性，使其所發(fā)射的熒光強(qiáng)度更強(qiáng)。因此，與LysoTracker系列探針相比，LysoSensor?系列探針隨著細(xì)胞器的酸化程度其熒光強(qiáng)度呈pH依賴型(向酸)增強(qiáng)。

本品LysoSensor? Green DND-189具有較低的pKa值，僅在酸性區(qū)室內(nèi)才具有熒光。本品以溶于無水DMSO的1 mM儲(chǔ)存液形式提供。

如對(duì)活細(xì)胞中的酸性區(qū)室進(jìn)行選擇性標(biāo)記和染色，可選擇LysoTracker?系列探針。

產(chǎn)品性質(zhì)

分子式（Molecular Formula）：C24H22N4O2

分子量（Molecular Weight）：398.46

Ex/Em：443?505nm

顏色（Color）：綠色

pKa：～5.2

步驟說明（僅限參考）

使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對(duì)其進(jìn)行簡短離心使DMSO溶液集中于管底。最佳工作濃度需根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)要求、細(xì)胞類型、細(xì)胞或組織的膜通透性等進(jìn)行優(yōu)化。

1. 工作液的配制

利用培養(yǎng)基或合適的緩沖液將1 mM 儲(chǔ)存液稀釋至工作濃度，推薦工作液濃度至少為1 μM；

注1：為了降低探針加載過度可能引起的假陽性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。2）若細(xì)胞在染色后于不含染料的培養(yǎng)基中孵育，會(huì)觀察到熒光信號(hào)的衰減和細(xì)胞的空泡化現(xiàn)象。

注2：工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。

2. 染色

2.1 對(duì)于貼壁細(xì)胞

1）將細(xì)胞置于培養(yǎng)皿中的蓋玻片上，加入合適培養(yǎng)基，使其爬片生長。

2）待細(xì)胞生長到合適豐度，吸除培養(yǎng)液，加入適量37℃預(yù)熱的含探針工作液。于生長狀態(tài)下孵育30 min～2 h（具體孵育時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類型而定）。

3）利用新鮮培養(yǎng)基替換上述染色液并在熒光顯微鏡（含合適濾片）下觀察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時(shí)間。

2.2 對(duì)于懸浮細(xì)胞

1）離心，吸除上清。

2）利用37℃預(yù)熱的探針工作液重懸細(xì)胞，于生長狀態(tài)下孵育30 min～2 h（具體時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類型而定）。

3）離心，吸除染色液，加入新鮮培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

4）置于熒光鏡下觀察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或加長染色時(shí)間。

注：對(duì)于懸浮細(xì)胞，也可將細(xì)胞貼附于經(jīng)BD Cell-Tak處理過的蓋玻片上，然后使用類似于貼壁細(xì)胞的方法進(jìn)行染色。

注意事項(xiàng)

1）不能儲(chǔ)存在無霜冰箱，建議按照單次用量分裝于-20℃凍存。

2）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸。-20℃避光干燥保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個(gè)月。

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