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  產(chǎn)品介紹

Hoechst 33258，也稱為bisBenzimide H 33258（雙苯酰亞胺H33258），是一種通過熒光顯微鏡和流式細胞儀進行DNA檢測的藍色熒光探針。Hoechst 33258可用于活細胞或固定細胞，也適用于流式細胞術(shù)對細胞周期的分析和DNA濃縮的監(jiān)測。雖然Hoechst 33258比其他衍生物（如Hoechst 33342）的細胞膜滲透性差些，但其能通過繪制發(fā)射光強度與DNA含量的標準曲線（a standard emission-to-content curve）來定量測量DNA含量。Hoechst 33258的最大激發(fā)波長是346nm，最大發(fā)射波長為460nm；與雙鏈DNA結(jié)合后的最大激發(fā)波長為352nm，最大發(fā)射波長為461nm。

本品以粉末形式提供，溶于水，溶解度可達10mg/ml。用于細胞核染色，推薦工作濃度為0.5-10μg/ml。

   產(chǎn)品性質(zhì)

1） CAS NO：23491-45-4

2） 英文同義名：4-[5-(4-Methyl-1-piperazinyl)[2,5′-bi-1H-benzimidazol]-2′-yl]-phenol.trihydrochloride;

bisBenzimide H 33258trihydrochloride; HOE 33258; BBIH; BXI-72;NSC33407;

3） 中文同義名：雙苯酰亞胺H 33258三鹽酸鹽；赫斯特熒光染料33258；煙酸己可堿三鹽酸鹽；

甲嗪雙苯咪酚三鹽酸鹽；

4） 分子式：C25H24N6O · 3HCl

5） 分子量：533.88

6） 純度：≥95%

7） 外觀：黃色至深黃色粉末

8） 溶解性：溶于水（10 mg/ml）

9） Ex/Em：346/460 nm；352/461 nm（Hoechst 33258-DNA）；

保存與運輸方法

保存：-20°C避光干燥保存，3年有效。

運輸：冰袋運輸。

儲存液配制

用雙蒸水溶解，溶解度高達10mg/ml，根據(jù)實際情況配制所需濃度的儲存液如5mg/ml。儲存液2-8oC避光保存，至少1個月有效?！咀⒁狻浚罕酒酚昧姿猁}緩沖液溶解會出現(xiàn)沉淀。

使用方法

1. 工作液配制

用雙蒸水或PBS稀釋母液，配制成所需要的工作濃度（0.5-10μg/ml）。

2. 固定的細胞或組織染色

對于固定的細胞或組織樣品，固定后，適當洗滌去除固定劑。Hoechst 33258染色通常在其他染色的最后進行。如果不需要進行其它染色，則直接進行Hoechst 33258染色。

2.1 對于貼壁細胞或組織切片：加入適量Hoechst 33258染色液，覆蓋住樣品即可。

對于懸浮細胞：至少加入待測染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5min。

2.2 吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5min。

2.3 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。Ex/Em=352/461nm。

3. 活的細胞或組織染色

3.1 細胞培養(yǎng)物中加入適量Hoechst 33258染色液，約1/10細胞培養(yǎng)基體積，必須充分覆蓋住待染色的樣品。對于六孔板，一個孔通常需加入1ml染色液；對于96孔板，一個孔通常需加入100μl染色液。

3.2 在37℃培養(yǎng)細胞10～20min。

3.3 用PBS或合適的緩沖液洗細胞兩次。

3.4 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。Ex/Em=352/461nm。

注意事項

1）Hoechst 33258對人體有一定刺激性，請注意適當防護。

2）熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測。

3）為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液（Fluoromount-GTM抗熒光淬滅封片劑（水溶性））。

4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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