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產(chǎn)品簡介：

Cell Tracker TM  CM-DiI熒光染料可以自由穿過細胞膜進入細胞，轉(zhuǎn)化為細胞膜不可滲透的反應(yīng)產(chǎn)物。Cell Tracker TMCM-DiI 染料通過幾代保留在活細胞中。Cell Tracker TMCM-DiI 染料至少能穩(wěn)定發(fā)出 72 h 的熒光，具有理想的跟蹤性能，且擁有性質(zhì)穩(wěn)定，工作濃度無毒性，良好的細胞保留性等優(yōu)點，在生理 pH 條件下可具有明亮的熒光。CM-DiI 在細胞固定、破膜及石蠟包埋的整個過程中均能很好的保留在細胞內(nèi)，因此，與傳統(tǒng)細胞膜探針DiI 相比較，更適于固定后標(biāo)本的長期示蹤。此外，CellTracker TM  CM-DiI 染料的激發(fā)和發(fā)射光譜與 GFP（綠色熒光蛋白）光譜充分分離，可以多種顏色復(fù)用，其紅色/綠色的光譜特征，使其可與綠色探針或者綠色熒光蛋白如GFP一起用于雙標(biāo)實驗。

產(chǎn)品特性:

分子式：C68H105Cl2N3O

分子量：1051.5

CAS 號：180854-97-1

Ex/Em: 553/570 nm

溶解性：溶于DMSO，乙醇，DMF

保存條件：-20℃避光保存。

實驗步驟：

1.  染色液制備

a.配置 DMF,DMSO 或 EtOH 儲存液：儲存液用 DMF ,DMSO 或 EtOH 配制濃度 1-2mg/ml 。

注： 未使用的儲存液保存在 -20 ℃，分裝保存，避免反復(fù)凍融。

b.工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基， HBSS 或 D-PBS ）稀釋儲存液，配制濃度為 1 ～ 2 μM 的工作液。

注： 最佳的工作液濃度請根據(jù)不同細胞和自身的實驗體系來調(diào)整。

2.  細胞標(biāo)記 （懸浮細胞）

a.在標(biāo)記前根據(jù)實驗要求按照上述方法配制好工作液；

b.建議待標(biāo)記細胞在染色工作液中于 37 ℃孵育≤ 5min ，再于 4 ℃孵育 15min （低溫孵育可降低細胞對染料的內(nèi)吞作用，有助于染料對質(zhì)膜的標(biāo)記，并且降低染料定位細胞質(zhì)囊泡的可能性）。

c. 標(biāo)記完成后，用 PBS 清洗細胞，并用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞。

注： 對于貼壁細胞，可直接就貼壁狀態(tài)的細胞進行熒光標(biāo)記，相較于消化處理后的細胞具有更高的活力。

3.  染色后處理

a. CM-DiI 染色后的細胞直接用 3.7%  甲醛（溶于 PBS ），于 37 ℃固定 10min ；

b.室溫條件 PBS 清洗 2 次，每次 5min ；

c.于 -20 ℃中，用丙酮透化處理 10min ；

d.室溫條件 PBS 清洗 2 次，每次 5min ；并根據(jù)自身的實驗要求以及細胞類型，進行后續(xù)的實驗如石蠟包埋 - 免疫組化分析，電鏡分析等。有報道提到，經(jīng) CM-DiI 染色后的大鼠嗜鉻細胞瘤細胞可兼容 2%(w/v) 多聚甲醛和 0.2%(w/v) Triton X-100 的透化作用；從綿陽淋巴細胞內(nèi)再次純化的 CM-DiI 標(biāo)記細胞，經(jīng)甲醛固定，石蠟包埋，切片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇，以及脫水后仍能維持熒光.

注意事項：

      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

      本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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