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產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品簡介：

DiD 染料是親脂性熒光染料家族成員之一，它可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。當 DiD 與細胞膜結(jié)合后其熒光強度大大增強，這類染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對細胞染色，這類染料在整個細胞膜上擴散，最佳濃度時可以使整個細胞膜染色。DiD（紅色熒光）可以用來對活細胞進行成像和流式分析。DiD可以用633 nmHe–Ne 激光器激發(fā)，有著比 DiI （一種常見的細胞熒光染料）更長的激發(fā)波長和發(fā)射波長，在細胞和組織染色中更有價值。

四種染料呈現(xiàn)不同的熒光顏色：DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光），為活細胞多色彩熒光成像分析和流式細胞術(shù)提供了一種便捷的工具。DiO和DiI分別用標準FITC和TRITC濾光器檢測，可結(jié)合使用。DiD可被633 nm 氦-氖（He-Ne）激光激發(fā)，具有比DiI更長的激發(fā)和發(fā)射光波長，特別適合用于標記具本底熒光的細胞和組織。而，DiR在體內(nèi)活體成像或者示蹤中意義非凡，因其所發(fā)射的紅外光可以高效地穿過細胞和組織，并且在紅外光范圍內(nèi)，其本底熒光水平很低。

產(chǎn)品特性

CAS NO.：78566-75-3

化學名：1,1-Dihexadecyl-3,3,3,3-tetramethylindocarbocyanine   perchlorate

分子式：C61H99ClN2O4

分子量：877.76

純度：≥95%（HPLC）

Ex/Em：549/565 nm

外觀：紅色粘性固體

推薦濾光器: XF32-Omega, 31002-Chroma

溶解性：DMF，DMSO，甲醇

保存條件：-20℃避光保存，一年有效。

使用方法：

染色液制備

a.配置DMSO儲存液：儲存液用DMSO配置濃度1～5 mM。

【注】：1未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反復凍融，可穩(wěn)定保存6個月。

必須保證所用溶劑新鮮無水。

工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1～5 μM的工作液。

工作液最終濃度建議根據(jù)不同細胞系和實驗體系來優(yōu)化。

b. 懸浮細胞染色

1.加入適當體積的染色工作液重懸細胞，使其密度為1×106/mL。

2.37 ℃孵育細胞 2～20 min，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同。可以20 min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記結(jié)果。

3.孵育結(jié)束，按1000～1500 rpm離心5 min。

4.傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預熱的生長培養(yǎng)液重懸細胞。

5.重復（3），（4）步驟兩次以上。

c. 貼壁細胞的染色

1.將貼壁細胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。

2.從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。

3.在蓋玻片的一角加入100 μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。

4.37 ℃孵育細胞 2～20 min，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同?？梢?span>20 min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記結(jié)果。

5.吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞，孵育5～10 min，然后吸干培養(yǎng)基。

d. 顯微鏡檢測

☆DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。

☆多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設(shè)定：

DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005

注意事項

熒光染料均存在淬滅問題，染色過程需盡量避光。

為了您的健康，實驗操作時請穿實驗服和帶一次性手套。

DiD 染色固定的細胞或組織樣品時，樣品宜使用配制在PBS 中的 4%多聚甲醛進行固定，使用其它不適當?shù)墓潭ㄒ簳е聼晒獗尘拜^高

表1細胞膜探針光譜和濾鏡編號: