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產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品簡介：

CFDA SE的全稱為Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，是一種近年來被廣泛應(yīng)用的細(xì)胞增殖檢測用熒光探針，也可以用于細(xì)胞的熒光示蹤?；?span>CFDA SE熒光標(biāo)記的細(xì)胞增殖檢測和[3H]-thymidine摻入、BrdU標(biāo)記獲得的檢測結(jié)果完全一致，但同時(shí)可以提供更多的細(xì)胞增殖信息。使用CFDA SE檢測可以提供整個(gè)細(xì)胞群中有多少比例的細(xì)胞分裂了1次、2次或更多次數(shù)，同時(shí)如果和其它熒光探針聯(lián)用，可以獲取不同分裂次數(shù)細(xì)胞的其它相關(guān)信息，CFDA SE可以通透細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，CFSE可以偶發(fā)性地(spontaneously)并不可逆地和細(xì)胞內(nèi)蛋白的Lysine殘基或其它氨基發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，并標(biāo)記這些蛋白。在加入熒光探針CFDA SE后大約24小時(shí)，即可充分標(biāo)記細(xì)胞。被CFDA SE標(biāo)記的非分裂細(xì)胞的熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標(biāo)記的時(shí)間可達(dá)數(shù)個(gè)月。CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一，比以前使用的其它細(xì)胞示蹤熒光探針例如PKH26的熒光更加均一，并且 分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也更均勻。

      由于CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均勻和穩(wěn)定，每分裂一次子代細(xì)胞的熒光會(huì)減弱一半，這樣通過流式細(xì)胞儀檢測就可以檢測出沒有分裂的細(xì)胞，分裂一次的細(xì)胞(1/2的熒光強(qiáng)度)，分離兩次的細(xì)胞(1/4的熒光強(qiáng)度)，分裂三次的細(xì)胞(1/8的熒光強(qiáng)度)以及類似的其它分裂次數(shù)的細(xì)胞。采用CFDA SE通過流式細(xì)胞儀檢測獲得的檢測結(jié)果參考右圖。每一個(gè)峰代表一種分裂次數(shù)的細(xì)胞，從右至左的峰通常依次為分裂0次、1次、2次、3次等次數(shù)的細(xì)胞。分裂次數(shù)較多后，分裂0次或1次等沒有分裂或分裂次數(shù)較少的細(xì)胞會(huì)逐漸減少直至檢測不到。

      使用CFDA SE可以檢測分裂多達(dá)8次或更多次數(shù)的細(xì)胞增殖。

      目前CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞后通常用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測。最常用于淋巴細(xì)胞的增殖檢測，也可以用于成纖維細(xì)胞、NK細(xì)胞等其它細(xì)胞的增殖檢測，甚至還可以用于細(xì)菌增殖的檢測。

      CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞呈綠色熒光，檢測時(shí)的激發(fā)波長可以選擇488nm，此時(shí)的發(fā)射波長為518nm，使用流式細(xì)胞儀檢測時(shí)可以采用FL1 detection channel。CFDA SE標(biāo)記的細(xì)胞也可以用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。

      CFDA SE標(biāo)記的細(xì)胞無論在體外還是體內(nèi)都不會(huì)使鄰近細(xì)胞染色。即CFDA SE熒光探針完成標(biāo)記后不會(huì)從一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到鄰近細(xì)胞。

      CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞僅需5-15分鐘即可完成。對于不同細(xì)胞，最佳標(biāo)記時(shí)間需自行摸索。

      CFDA SE可以使用無水DMSO(anhydrous DMSO)配制，配制濃度通常為2-10mM，該溶液宜盡快使用，最長保存時(shí)間不宜超過2個(gè)月。CFDA SE易被水解，如用PBS或其他溶液配制好的工作液須盡快使用，否則在水溶液中會(huì)很快變質(zhì)。在標(biāo)記細(xì)胞的過程中和水接觸是在許可的范圍內(nèi)的。CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞時(shí)的最終濃度通常為0.2-10μM或更高一些。

      在工作濃度為5μM時(shí)，一個(gè)包裝的本產(chǎn)品共可以標(biāo)記約1.8升的細(xì)胞。

產(chǎn)品特性

CAS NO.：150347-59-4

化學(xué)名：3',6'-bis(acetyloxy)-3-oxo-2,5-dioxo-1-pyrrolidinyl ester-spiro[isobenzofuran-1(3H),9'-[9H]xanthene] -ar-carboxylic acid

同義名：5(6)-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester, 5(6)-CFDA N-succinmidyl ester, CFDA-SE

分子式：C29H19NO11

分子量：557.46

純度：≥94%（HPLC）

Ex/Em：492/517nm

外觀：近乎白色至黃色粉末或結(jié)晶

溶解性：溶于DMSO，DMF

保存條件：-20℃避光保存，一年有效。

使用方法：

a. CFSE儲(chǔ)存液（5mM）的配制，用1ml DMSO溶解2.79mg CFSE，充分混勻即得到5mM的儲(chǔ)存液（1mg/ml的CFSE溶液濃度，相當(dāng)于其摩爾濃度1.8mM）?！咀⒁狻吭搩?chǔ)存液需立即使用，根據(jù)使用量計(jì)算如有剩余請務(wù)必分裝后于≤-20℃避光干燥保存，避免反復(fù)凍融。

b. CFSE工作液（0.5-5μM）的配制，使用前用含20mM Hepes的Hanks 緩沖液（HHBS）或其他不含氨基的合適緩沖液（pH=7.0），對上述CFSE 儲(chǔ)存液進(jìn)行1,000~10,000倍稀釋，并旋渦震蕩混勻。

c. 注意

以下是針對活細(xì)胞染色的推薦步驟，可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，用適當(dāng)藥物處理細(xì)胞；離心收集細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為1-5×105個(gè)/管；用500μl CFSE工作液懸浮細(xì)胞，于室溫或37℃避光孵育10-30min；吸除CFSE 染液，用HHBS或其他合適緩沖液清洗細(xì)胞，用500μl預(yù)熱HHBS或培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞；在Ex/Em=490/520nm下用流式細(xì)胞儀（FL1通道）或熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。

注意事項(xiàng)

不同的細(xì)胞其細(xì)胞內(nèi)酯酶活性不同，因此染色效果具有差異性。

熒光染料均存在淬滅問題，染色過程需盡量避光。

為了您的健康，實(shí)驗(yàn)操作時(shí)請穿實(shí)驗(yàn)服和帶一次性手套。