DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 細胞膜紅色熒光探針
| 貨號 | S5419 | 售價（元） | 1428.9 |
| 規(guī)格 | 25mg | CAS號 | 127274-91-3 |
- 產品簡介
- 相關產品
產品信息：
|
貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
存儲 |
|
S5419 |
DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 細胞膜紅色熒光探針 |
5mg |
-20℃ |
產品簡介：
DiD 染料是親脂性熒光染料家族成員之一，它可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結構。當 DiD 與細胞膜結合后其熒光強度大大增強，這類染料有著很高的淬滅常數和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對細胞染色，這類染料在整個細胞膜上擴散，最佳濃度時可以使整個細胞膜染色。四種染料呈現不同的熒光顏色：DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光），為活細胞多色彩熒光成像分析和流式細胞術提供了一種便捷的工具。DiO和DiI分別用標準FITC和TRITC濾光器檢測，可結合使用。DiD可被633 nm 氦-氖（He-Ne）激光激發(fā)，具有比DiI更長的激發(fā)和發(fā)射光波長，特別適合用于標記具本底熒光的細胞和組織。而，DiR在體內活體成像或者示蹤中意義非凡，因其所發(fā)射的紅外光可以高效地穿過細胞和組織，并且在紅外光范圍內，其本底熒光水平很低。
產品特性
CAS NO.：127274-91-3
化學名：1,1-Dihexadecyl-3,3,3,3-tetramethylindocarbocyanine perchlorate
分子式：C61H99ClN2O4
分子量：959.91g/mol
純度：≥95%
Ex/Em：644/665 nm
外觀：紫色或深藍色固體
溶解性：DMF，DMSO，甲醇
保存條件：-20℃避光保存，一年有效。
使用方法：
1、染色液制備
a.配置DMSO儲存液：儲存液用DMSO或EtOH配置,濃度1～5 mM。
【注】：1未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反復凍融，可穩(wěn)定保存6個月。
必須保證所用溶劑新鮮無水。
b.工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1-5μM的工作液。
【注】：工作液最終濃度建議根據不同細胞系和實驗體系來優(yōu)化。
2、 懸浮細胞染色
1) 加入適當體積的染色工作液重懸細胞，使其密度為1×106/mL。
2) 37 ℃孵育細胞 2～20 min，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同?？梢?0 min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記結果。
3) 孵育結束，按1000～1500 rpm離心5 min。
4) 傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預熱的生長培養(yǎng)液重懸細胞。
5) 重復（3）、（4）步驟兩次以上。
3、貼壁細胞的染色
1) 將貼壁細胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。
2) 從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。
3) 在蓋玻片的一角加入100 μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。
4) 37 ℃孵育細胞 2～20 min，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同。可以20 min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記結果。
5) 吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞，孵育5～10 min，然后吸干培養(yǎng)基。
4、顯微鏡檢測
1) DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。
2) 多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設定：
DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；
DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；
DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005
5、流式細胞儀的檢測
DiD，DiO，DiI，DiR和DiS 染色的細胞可以分別用經典的FL1，FL2，FL3和FL4流式細胞儀檢測。
表1. DiD，DiO，DiI，DiR，DiS的化學性質
注意事項
熒光染料均存在淬滅問題，染色過程需盡量避光。
為了您的健康，實驗操作時請穿實驗服和帶一次性手套。
DiD 染色固定的細胞或組織樣品時，樣品宜使用配制在PBS 中的 4%多聚甲醛進行固定，使用其它不適當的固定液會導致熒光背景較高